2024年研究生试卷

深圳大学研究生期末考试试卷。

命题人(签字审题人(签字2024年 12月 30日。

一、名词解释。

western blot;

polymerase chain reaction;

sds-page;

rnaipull-down

二、回答下列问题。

1. you h**e two bacteria strains of j1 and d2. j1 is an ampicillin resistant stain while the d2 is an ampicillin sensitive one.

what experiments you h**e to do to identify if the antibiotic-resistant gene located on the plasmid? 假设实验室有两株菌j1和d2，其中j1是具有氨苄抗性，而d2为无氨苄抗性菌株。请设计相关实验流程，证明氨苄抗性基因位于对应的菌株质粒中。

2. 如下图所示，现有一模板为300bp的一段dna序列，以及在此序列3’端有一30bp互补的引物：

30 bp

3'-tagcgctcgatc … 5'

假设实验室已有dna聚合酶与合适的缓冲液，加入以下核苷酸后，将得到多少bp的引物延伸产物？

a). 全部四种dntps (datp, dctp, dttp, dgtp)；

b). 全部四种 (datp, dctp, dttp, dgtp) 和 ddgtp；

c). 只有三种dntps (dgtp, datp, dctp) 和 ddttp。

3. 简述哺乳动物细胞培养的日常操作项目及重要细节。

4. 简述荧光双向差异凝胶电泳（2d-dige）与经典双向电泳（2-de）技术的主要区别。

5. 根据以下实验结果写一个摘要，包括：目的、方法、结果和结论（200-）

figure 1. pc-6 cells were treated with 5-aza-dc. rt-pcr products are indicated for bcrp (top) and for the human b-actin gene (actb) (middle).

relative bcrp mrna expression was evaluated as the bcrp/actb ratio by using semi-quantitative rt-pcr (bottom).

figure 2. correlation between promoter methylation of the breast cancer resistance protein gene (bcrp) and bcrp mrna expression in several lung cancer cell lines. m indicates pcr products using an methylation-specific polymerase chain reaction (msp) primer pair, and u indicates pcr products using an unmethylation-specific pcr primer pair.

pcr products by msp are indicated for msp (top). reverse transcriptase (rt)-pcr products are indicated for bcrp mrna and human β-actin gene (actb) mrna (middle). relative bcrp mrna expression in each cell was evaluated as the bcrp/actb ratio (bottom).

nci indicates other unselected, human, nonsmall cell lung cancer cell lines.

参***：目的：为了研究肿瘤细胞bcrp表达与bcrp启动子的关系。

方法：采用rt-pcr和甲基化特异性pcr的方法和请制糖凝胶电泳技术。结果：

随着5-zaz-dc浓度的增加pc-6细胞bcrpmrna的表达量逐渐增加，且发现在检测的6中细胞中bcrp启动子甲基化程度不同，pc-6/5n2-5h启动子未甲基化，而pc-6细胞启动子是甲基化的，在nci系列细胞中启动子既有甲基化部分也有未甲基化部分。而且甲基化程度与bcrpmrna的表达成反比关系。结论：

启动子的甲基化与bcrp表达有关。

6.根据如下a、b两个图示、试述该实验的结果和意义。

a: rnai effects of different mutants of cadherin(cdh1,钙粘附素）sirna on on cdh1 expression；b: rnai effects of different stem-loops on cdh1 expression (the results are indicated by western blots)

参***：a图说明构建到载体中的sirna是不同的突变体，结果表明cdh1-sirna和psuper-cdh1-b对cdh1的干扰效果最好，而mut-9 和mut-2几乎没有干扰作用；b图说明cdh1-sirna和psuper-cdh1-b对cdh1的干扰效果最好，而a和c的环的影响他们的干扰效果较差。

阅读下列材料，对结果进行解释 (15分) 。该文作者在进行这一实验之前已通过酵母双杂交技术用14-3-3蛋白从胰岛素处理了的老鼠肝细胞的表达文库中调取获得了irs-2蛋白，请你试想其实验过程并对其实验基本过程进行描述(10分)。

igf-1 stimulation leads to interaction of irs-2 （一种胰岛素受体基质） and 14-3-3 as has been shown by ogihara et al. and dubois et al.. it is known that the majority of interactions between 14-3-3 proteins and their partners are dependent on phosphorylation of serine/threonine residues within discrete motifs.

in a first experiment the interaction between irs-2 and 14-3-3 was verified in hek293 cells transiently expressing gfp-irs2. immunoprecipitation of endogenous 14-3-3 also pulled down irs-2 as indicated by western blot ([

to evaluate the physiological importance of 14-3-3 binding to irs-2 we tested if the overlay assay could show 14-3-3 binding to irs-2 in mouse liver after an acute insulin (胰岛素) stimulus ([

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