伤寒 3 解析

发布 2022-07-04 15:48:28 阅读 4928

四、伤寒病理模型的建立方法。

一)吴茱萸汤对肝寒犯胃家鸽呕吐模型的防治作用的实验观察。

1.名称:吴茱萸汤对肝寒犯胃家鸽呕吐模型的防治作用。

2.目的:研究吴茱萸汤对肝寒犯胃家鸽呕吐模型的防治作用。

3.实验材料:5ml注射器,8号导尿管,手表,压舌板;吴茱萸汤水煎液1g/ml(吴茱萸汤组成:

吴茱萸10g,党参10g,生姜20g,大枣15g。取吴茱萸汤全方加水500ml浓煎取汁55ml。)吴茱萸水煎液0.

6g/ml(吴茱萸10g加水250ml,浓煎取汁16.7ml);胆矾水溶液20mg/ml(胆矾由广州市药材公司提供)。

4.实验对象:体重300至400克健康家鸽(雌雄不限)。

5.实验环境:温度20~25℃,湿度60~80%。

6.操作步骤。

取健康家鸽30只,随机分为甲乙丙三组:吴茱萸汤全方组(甲组)、吴茱萸单味组(乙组)、冷开水对照组(丙组),每组各10只,均贴好标签,禁食12小时。以胆矾水溶液给家鸽灌胃,因为胆矾的主要成分为硫酸铜,其味酸辛性寒,易于寒伤脾胃,故可造成肝寒犯胃之呕吐模型。

而吴茱萸汤温中散寒降逆止呕,故可以本实验观察其温胃止呕作用。

两人合作,一人取做位,左手握住家鸽,右手食指与大拇指环绕其后颈,固定头部,另一人将压舌板横放于鸽口中,以8号导尿管由舌上插入食道约15cm。然后以注射器注入药液(甲组注入吴茱萸汤水煎液,乙组注入吴茱萸水煎液,丙组注入冷开水。)一次,体积均按10ml/kg。

给药后一小时,每鸽灌服胆矾200mg/kg,完毕立即计下时间,记录各鸽出现第一次呕吐的时间(呕吐潜伏期)和给胆矾水溶液后1小时内呕吐的次数(呕吐频率)。观察吴茱萸汤和吴茱萸对家鸽灌服胆矾水溶液所致呕吐的影响,所得资料进行统计学检验。

7.实验结果。

吴茱萸汤对肝寒犯胃家鸽呕吐模型的影响(±s)

药物例数呕吐潜伏期干呕总次数呕吐次数呕吐量呕吐物性状其它。

(分) (ml)

甲组。乙组。

丙组。注:乙、甲比较,p ;丙、乙比较,p 。

8、模型评价。

出现呕吐物或干呕》5次/分钟即为模型成功。

9、注意事项:为避免误入气管,可将导尿管外口浸入水中,不见气泡表示插入胃中。

二)少阴病阳虚水停证家兔模型的建立。

1、名称:少阴病阳虚水停证家兔模型。

2、目的:建立类似于伤寒论少阴病阳虚水停证的动物模型。

3、实验材料:①寒凉药灌胃液的制备:石膏和知母按2:

1.5比例配伍,常规水煎两次,浓缩成100%水煎液,于4℃保存。②升主动脉缩窄环:

环由两层组成,外层用硬质铝片,宽约3mm,厚约1.2mm,长度1.8-2.

4cm,以0.1cm递增预备各种长度不等的铝片备用。操作时长度以每个动物升主动脉周径的2/3为宜。

内层为能吸水膨胀的两片干海带。两层周围包绕一层塑料膜密封。用之前,在塑料膜上用针头刺多个针眼以便环内层材料逐渐吸水膨胀,而达到升主动脉逐渐缩窄与压迫的目的。

③手术器械。④rm-6000四道生理记录仪(日本产)。⑤7071型半导体点温度计(上海产)。

⑥动物人工呼吸机(江西)。

4、实验对象:体重2.0-3.0kg新西兰家兔,雌雄兼用,5、实验环境:温度20~25℃,湿度60~80%。

6、操作步骤。

在实验时每天灌服寒凉药1次,剂量为7ml/kg(7g/kg),相当于按人体表面积计算后剂量的7倍左右,连续7天。②于第8天将兔固定于手术台上,用脱毛剂脱去胸部毛发,酒精、碘酒常规消毒3次,2%普鲁卡因局部麻醉,在无菌条件下,沿胸骨左缘切开**、肌肉,剪断第肋骨,用开胸器撑开暴露心脏,注意避免损伤胸膜及剪破心脏。再夹住心耳部,稍提起,暴露冠状动脉,在冠状动脉起始部下0.

5cm处,用丝线结扎左冠状动脉前降支,为防侧枝循环,再在结扎处的下方约1cm处再行结扎。然后用血管分离钳分离主动脉,用自制缩窄环套住升主动脉,使两端相接,环的长度较升主动脉周径的2/3长1-2mm(从而缩窄升主动脉1/3,几天后,因海带吸水发泡可使升主动脉口径缩小至原来的1/3左右)。关闭心包膜和胸腔,缝合切口。

整个手术期间均维持兔的自主呼吸。③以青霉素40万单位肌注,每天2次,连续3天。如兔不进食,则以5%葡萄糖5-10ml静脉注射,每天2-3次。

7-10天后观察。④在造模后不同时间以半导体温度计测定腹部及肢体(左后足、右前足)温度。可见在手术后第七天肢体温度降低。

动物出现倦卧、活动减少、毛发枯燥、口及耳部发绀、足部水肿。⑤手术后第七天,再以3%戊巴比妥钠麻醉,按心电图测定法测动物肢体导联心电图。切开颈部**,分离颈总动脉,从左颈总动脉插入充满肝素的导管至左心室,导管的另一端与压力传感器相连,固定导管。

待动物稳定后测定左室内压(lvp)、左室内压最大上升速率(lv dp/dt max)及心率(hr)。结果发现lvp升高,dp/dt max升高,而心率无明显变化。

7、模型评价。

本模型采用先灌服寒凉药制造阳虚模型,在此基础上采用缩窄升主动脉和模拟心肌缺血的方法,引起动物充血性心力衰竭,动物在症状体征、体温及血流动力学检查均与阳虚合并心衰改变相似。且以真武汤进行反证性**,表明真武汤对该模型有效。可见,该模型类似于伤寒论少阴病阳虚水停证。

8、注意事项:手术时细心操作,避免损伤胸膜、大血管、心肌。严格按无菌要求操作。术后注意加强抗菌**。

三)少阴寒化证大鼠模型的建立。

1、名称:少阴寒化证大鼠模型。

2、目的:建立少阴寒化证大鼠模型,为六经病的现代化研究提供载体。

3、实验材料:①β溶血性链球菌(北京中国药品生物制品检定所提供)。②寒凉中药复方煎剂:

知母、石膏、黄柏、龙胆草(比例为1.5:2:

1:1),常规水煎两次,浓缩成200%(生药含量为2g/ml)药液备用。③代谢笼。

④lx-5动物脉搏换能器(湖南医大生理研究室产),lms-2b型二道生理记录仪(成都科学仪器厂产)。⑤手术器械,大鼠实验台。

4、实验对象:处于生长期的wistar 大鼠,雌雄各半,体重180~230克。

5、实验环境:温度20~25℃,湿度60~80%。

6、操作步骤。

所有大鼠均单个饲养在代谢笼中,自由摄食和摄水,实验室环境温度为10±2℃;先以200%的寒凉中药复方煎剂灌胃,剂量为6g/只,每天一次,连续14天。第15天由尾静脉注射β-溶血性链球菌,每次1ml(0.1×1010/ml),每七天注射1次,共2~4次。

造模后进行以下观察:①主要症状:造模后大鼠毛发蓬松,毛色枯燥无光泽,易脱落,匍匐行走,懒动,嗜睡,大便溏不成颗粒状,舌质色暗。

②扭体次数减少。③尿量增加。④饮水量减少。

⑤以动物脉搏换能器测定大鼠尾动脉振动幅度,可见其搏动幅度减弱。⑥体表温度下降,体表温度与舌下温度的温差增大。⑦舌体微循环障碍。

⑧血浆皮质醇浓度降低。⑨体重增长减慢。

7、模型评价。

本模型以寒凉中药造成阳虚,在此基础上以β-溶血性链球菌造成心、肾损伤,造模后动物表现阳虚症状、体征,组织学观察可见到心肾损害,以四逆汤反证对该模型有明显的改善作用,表明该模型制作成功,类似于人类少阴病寒化证的变化。

8、注意事项:①实验环境温度要控制严格;②动物应单个饲养,以便于观察和测定。

四)少阴病心肾阳虚证家兔模型的建立。

1、名称:家兔少阴病心肾阳虚证模型。

2、目的:建立家兔少阴病心肾阳虚证模型。

3、实验材料:①寒凉药液:知母石膏按1.

5:2比例配伍,常规水煎,浓缩成100%(1g生药/ml)药液。②麻黄汤药液:

麻黄、桂枝、炙甘草、杏仁按3:2:1:

3的比例配伍,常规水煎,浓缩成100%水煎液。③2,4-二硝基苯酚。④胆固醇。

⑤蛋黄粉。⑥猪油。⑦皮质醇、6-酮-前列腺素f!

a、内皮素(et)、肿瘤坏死因子(tnf)、血脂(tc、hdl、tg)等测定试剂。

4、实验对象:2.5kg左右的新西兰雄性家兔(雌雄不限)。

5、实验环境:温度20~25℃,湿度60~80%。

6、操作步骤。

家兔在80%基础饲料中加入15%蛋黄粉,0.5%胆固醇、5%猪油,以此饲料连续喂养3周。3周后饲料中不加胆固醇,只喂含蛋黄粉和猪油的饲料,继续喂养3周。

喂养期间自由摄食和饮水。在饲喂同时,于第5周起灌胃寒凉药液7ml/kg(相当于人等效剂量的7倍左右),连续1周。第7周起,实验兔皮下注射2,4-二硝基苯酚30mg/kg。

1.5小时后灌服麻黄汤以发汗,每天一次,连续一周,于实验第7周后检测。

造模后检测:①血浆皮质醇含量降低;②血浆6-keto-pgf!a含量降低;③血浆et浓度升高;④血浆tnf含量升高;⑤血脂(tc、ldl)升高,hdl含量降低;⑥主动脉形态结构观察,见内皮细胞受损,内膜增厚,有大量平滑肌源性和单核细胞源性泡沫细胞,平滑肌细胞示合成型,中膜平滑肌细胞排列紊乱,含大量脂质空泡。

7、模型评价。

该模型先饲以高脂饲料造成动脉粥样硬化,继而根据中医大汗亡阳、阴损及阳的原理,以寒凉药和麻黄汤发汗损伤人体阳气,导致动脉粥样硬化合并阳虚证,并且以具有温阳活血作用的药物(四逆汤合抵当汤)反证**,对上述病理变化均有改善作用,提示该模型类似人类少阴病心肾阳虚证。

8、注意事项:①严格按配方比例配制高脂饲料,注意饲料保洁;②动物应单个饲养,以便于观察和测定。

五)少阴病热化证大鼠模型的建立。

1、名称:少阴病热化证大鼠模型。

2、目的:建立类似少阴病热化证的内毒素所致弥散性血管内凝血(dic)动物模型。

3、实验材料:①大肠杆菌脂多糖(lps,sigma公司产,from e coli055,b5),用时以生理盐水在无菌条件下配制成0.1mg/ml溶液。

②半导体体温计。③dic检测相关试剂。

4、实验对象:sd大鼠体重180~220g,雌雄均用。

5、实验环境:温度20~25℃,湿度60~80%。

6、操作步骤。

大鼠按0.1mg/kg(1ml/kg)剂量腹腔注射lps,24小时同前法腹腔注射lps。根据2024年全国第五届血栓与止血会议制订的dic诊断标准对实验动物进行观察:

①一般表现:动物表现出烦燥、精神差,进食减少,大便干燥,小便短赤等症状。②体温(肛温):

第1次注射lps后3小时体温开始上升,至第7小时升至最高,其后缓慢下降,但至第二次注射lps后体温仍升高。③出凝血试验:造模后血小板数降低,凝血酶原时间(pt)和活化部分凝血活酶时间(aptt)延长,纤维蛋白原含量升高,3p试验阳性,符合dic的表现。

④血液学检查:血中rbc、wbc数均下降,红细胞平均体积减小。⑤病理学检查可见肺灶性出血、水肿,肝瘀血,肺泡壁毛细血管及肾小球毛细血管内可见血栓,肾近曲小管上皮细胞坏死。

7、模型评价。

本模型以中医理论为依据,以内毒素腹腔注射造成大鼠dic模型。内毒素通过shwartzman反应,引起微血管内血栓形成,导致继发性出血,这与中医血热出血证相似,又实验室检查及病理观察均表明,该模型兼阴虚血瘀之证,故本模型类似于阴虚热盛兼血瘀之出血证,相当于少阴病热化证。

8、注意事项。

注射lps的量不可过大,否则常导致动物死亡;②在测定血液学指标时,最好用塑料器皿,如用玻璃器皿则应硅化。③血液学检测应在4小时内完成。取血后如暂时不测定,则应加盖后置4℃冰箱中保存。

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