高中生物教师实验技能提升培训 一

发布 2022-04-21 19:38:28 阅读 5457

组织单位:教研室。

指导专家:巩仁洪

培训内容:遗传物质(dna)粗产物提取。

中学高级教师、生物学专家巩仁洪在讲解。

武义一中实验室钟慧娥老师。

胡枫老师陈新旦老师。

江美萍老师徐大申老师。

吴邹臻老师俞巧仙老师(前)

舒芳红老师钟慧娥老师(左)蓝旭芬老师(右)

郑亦霞老师。

实验结果:遗传物质(dna)粗产物提取成功。

实验指导书面材料: 鸡血dna粗产物的提取。

用鸡血细胞做实验材料有两个原因:一是因为鸡血细胞核的dna含量丰富,材料易得;二是鸡血细胞极易吸水胀破,而用动物肝脏细胞作实验材料常常需要匀浆和离心,对设备要求较高,操作繁琐,历时较长。

具体制备方法如下:取质量浓度为0.1 g/ml的柠檬酸钠溶液100 ml,置于500 ml烧杯中,注入新鲜的鸡血(约180 ml),同时用玻璃棒搅拌,使血液与柠檬酸钠溶液充分混合,以免血液凝结。

将烧杯中的血液置于冰箱内,静置1 d,使血细胞自行沉淀。用吸管除去上部的澄清液,就可以得到鸡血细胞液。鸡血细胞破碎以后释放出的dna,容易被玻璃容器吸附,所以在提取过程中为了减少dna的损失,最好使用塑料的烧杯和试管盛放鸡血细胞液。

提取dna的具体步骤。

1.破碎细胞,释放dna

鸡血细胞中的dna与核蛋白结合,位于鸡血细胞的细胞核中,正常情况下是不会释放出来的。为了使dna从细胞核中释放出来,需要向鸡血细胞液中加入蒸馏水,并且搅拌,从而使血细胞膜和核膜胀破。用玻璃棒搅拌可以加速细胞的破裂。

注意应沿一个方向快速搅拌,但也不能太快太猛,防止打碎dna。一般5~10 ml的鸡血细胞液加入20 ml蒸馏水搅拌5 min。释放出来的大量dna和rna往往与蛋白质结合在一起,应用3~4层纱布进行过滤,除去一些颗粒较大的杂质。

2.溶解细胞核内的dna

在浓度较高的nacl溶液中核蛋白容易解聚,游离出的dna溶解在溶液中。在溶液中加入两倍体积的浓度为2 mol/l的nacl溶液,搅拌1 min。注意应沿一个方向搅拌,使dna充分溶解。

3.dna的析出。

将溶液中的dna与其他杂质分离,这一步骤是实验成败的关键。加蒸馏水降低nacl溶液浓度,使dna析出。实验中应该缓慢贴壁加入蒸馏水,并轻轻地沿一个方向不停地均匀搅拌,以利于dna分子的附着和缠绕。

同时应注意控制加水量,使nacl溶液的终浓度为0.1~0.2 mol/l。

加水过程一般分三次进行,当总加水量为300 ml左右时,dna已基本析出。加水太多、溶液过稀,会使dna分子又重新溶解。

用3~4层纱布对dna稀释液进行过滤,滤去蛋白质,收集dna的黏稠物。此时注意观察dna黏稠物的颜色。

的初步纯化。

如果提取的dna量不够多且其中含有较多杂质,或者加入溶液和搅拌等操作过程不规范,都会导致实验现象不明显,常常使制取的dna粗制品不能显示出dna的本色──白色。为了增进实验效果,需要对dna粗制品进行简单的提纯。

将dna黏稠物再溶解,继续用2 mol/l的nacl溶液20 ml溶解dna黏稠物,仍旧沿一个方向不停搅拌3 min,使dna充分溶解,以免损失。用3~4层纱布进行过滤,滤去杂质,收集含有dna的滤液。向滤液中贴壁缓慢加入50 ml预冷的体积分数为95%的乙醇,并用玻璃棒朝一个方向缓慢、均匀地搅拌,溶液中会出现dna丝状物。

实验一般要求采用预冷的95%的乙醇,但对比结果显示,常温下的乙醇溶液也可产生明显效果。从理论上分析,预冷的乙醇溶液具有以下优点:一是抑制核酸水解酶活性,防止dna降解;二是降低分子运动,易于形成沉淀析出;三是低温有利于增加dna分子柔韧性,减少断裂。

此时悬浮于溶液中的dna丝状物相对含杂质较少,如果出现的丝状物较少,可以将此混合液再放入冰箱中冷却几分钟。浓缩后的dna丝状物,可以用缓缓旋转玻璃棒的方法卷起(因为玻璃棒有吸附dna的作用)。如果dna丝状物较少,不易吸附在玻璃棒上,也可以用筷子等表面粗糙的用具来帮助dna分子缠绕。

高中生物教师实验技能提升培训 一

组织单位 教研室。指导专家 巩仁洪 培训内容 遗传物质 dna 粗产物提取。中学高级教师 生物学专家巩仁洪在讲解。武义一中实验室钟慧娥老师。胡枫老师陈新旦老师。江美萍老师徐大申老师。吴邹臻老师俞巧仙老师 前 舒芳红老师钟慧娥老师 左 蓝旭芬老师 右 郑亦霞老师。实验结果 遗传物质 dna 粗产物提取...

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