组织单位：教研室。
指导专家：巩仁洪
培训内容：遗传物质（dna）粗产物提取。
中学高级教师、生物学专家巩仁洪在讲解。
武义一中实验室钟慧娥老师。
胡枫老师陈新旦老师。
江美萍老师徐大申老师。
吴邹臻老师俞巧仙老师（前）
舒芳红老师钟慧娥老师（左）蓝旭芬老师（右）
郑亦霞老师。
实验结果：遗传物质（dna)粗产物提取成功。
实验指导书面材料： 鸡血dna粗产物的提取。
用鸡血细胞做实验材料有两个原因：一是因为鸡血细胞核的dna含量丰富，材料易得；二是鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细胞作实验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求较高，操作繁琐，历时较长。
具体制备方法如下：取质量浓度为0.1 g/ml的柠檬酸钠溶液100 ml，置于500 ml烧杯中，注入新鲜的鸡血（约180 ml），同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸钠溶液充分混合，以免血液凝结。
将烧杯中的血液置于冰箱内，静置1 d，使血细胞自行沉淀。用吸管除去上部的澄清液，就可以得到鸡血细胞液。鸡血细胞破碎以后释放出的dna，容易被玻璃容器吸附，所以在提取过程中为了减少dna的损失，最好使用塑料的烧杯和试管盛放鸡血细胞液。
提取dna的具体步骤。
1.破碎细胞，释放dna
鸡血细胞中的dna与核蛋白结合，位于鸡血细胞的细胞核中，正常情况下是不会释放出来的。为了使dna从细胞核中释放出来，需要向鸡血细胞液中加入蒸馏水，并且搅拌，从而使血细胞膜和核膜胀破。用玻璃棒搅拌可以加速细胞的破裂。
注意应沿一个方向快速搅拌，但也不能太快太猛，防止打碎dna。一般5～10 ml的鸡血细胞液加入20 ml蒸馏水搅拌5 min。释放出来的大量dna和rna往往与蛋白质结合在一起，应用3～4层纱布进行过滤，除去一些颗粒较大的杂质。
2．溶解细胞核内的dna
在浓度较高的nacl溶液中核蛋白容易解聚，游离出的dna溶解在溶液中。在溶液中加入两倍体积的浓度为2 mol/l的nacl溶液，搅拌1 min。注意应沿一个方向搅拌，使dna充分溶解。
3．dna的析出。
将溶液中的dna与其他杂质分离，这一步骤是实验成败的关键。加蒸馏水降低nacl溶液浓度，使dna析出。实验中应该缓慢贴壁加入蒸馏水，并轻轻地沿一个方向不停地均匀搅拌，以利于dna分子的附着和缠绕。
同时应注意控制加水量，使nacl溶液的终浓度为0.1～0.2 mol/l。
加水过程一般分三次进行，当总加水量为300 ml左右时，dna已基本析出。加水太多、溶液过稀，会使dna分子又重新溶解。
用3～4层纱布对dna稀释液进行过滤，滤去蛋白质，收集dna的黏稠物。此时注意观察dna黏稠物的颜色。
的初步纯化。
如果提取的dna量不够多且其中含有较多杂质，或者加入溶液和搅拌等操作过程不规范，都会导致实验现象不明显，常常使制取的dna粗制品不能显示出dna的本色──白色。为了增进实验效果，需要对dna粗制品进行简单的提纯。
将dna黏稠物再溶解，继续用2 mol/l的nacl溶液20 ml溶解dna黏稠物，仍旧沿一个方向不停搅拌3 min，使dna充分溶解，以免损失。用3～4层纱布进行过滤，滤去杂质，收集含有dna的滤液。向滤液中贴壁缓慢加入50 ml预冷的体积分数为95％的乙醇，并用玻璃棒朝一个方向缓慢、均匀地搅拌，溶液中会出现dna丝状物。
实验一般要求采用预冷的95％的乙醇，但对比结果显示，常温下的乙醇溶液也可产生明显效果。从理论上分析，预冷的乙醇溶液具有以下优点：一是抑制核酸水解酶活性，防止dna降解；二是降低分子运动，易于形成沉淀析出；三是低温有利于增加dna分子柔韧性，减少断裂。
此时悬浮于溶液中的dna丝状物相对含杂质较少，如果出现的丝状物较少，可以将此混合液再放入冰箱中冷却几分钟。浓缩后的dna丝状物，可以用缓缓旋转玻璃棒的方法卷起(因为玻璃棒有吸附dna的作用)。如果dna丝状物较少，不易吸附在玻璃棒上，也可以用筷子等表面粗糙的用具来帮助dna分子缠绕。
高中生物教师实验技能提升培训 一
组织单位 教研室。指导专家 巩仁洪 培训内容 遗传物质 dna 粗产物提取。中学高级教师 生物学专家巩仁洪在讲解。武义一中实验室钟慧娥老师。胡枫老师陈新旦老师。江美萍老师徐大申老师。吴邹臻老师俞巧仙老师 前 舒芳红老师钟慧娥老师 左 蓝旭芬老师 右 郑亦霞老师。实验结果 遗传物质 dna 粗产物提取...
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