1.试剂及其配制。
1.1氯化钙溶液（27.5g/l）:溶解27.5g氯化钙于水中，稀释至1l，盛于试剂瓶中。
1.2三氯化铁溶液（0.25g/l）:溶解0.25g三氯化铁于水中，稀释至1l，盛于试剂瓶中。
1.3硫酸镁溶液（22.5g/l）:溶解22.5g硫酸镁于水中，稀释至1l。盛于试剂瓶中。
1.4磷酸盐缓冲溶液（ph≈7.2）：
溶解8.5g磷酸二氢钾，21.75g磷酸氢二钾，33.
4g磷酸氢二钠和1.7g氯化铵于约500ml水中，稀释至1l。此缓冲溶液ph为7.
2，不需再做调节。
1.5测定溶解氧所需试剂及其配制。
2.分析步骤。
2.1稀释水的制备。
在20l玻璃瓶中加入一定体积的睡，经过8h~12h曝气后，使溶解氧接近饱和，盖严静置，备用。使用前于每升水中各加1ml磷酸盐华纳冲溶液、1ml硫酸镁溶液、1ml氯化钙溶液和1ml三氯化铁溶液，混匀。
2.2水样采集和培养。
水样采集和培养按一下步骤进行：
a)水样采集后应在6h内开始分析，若不能，则在4℃或4℃以下保存，而且不得超过24h，并将贮存时间和温度与分析结果一起报告；
b)对未受污染海区的水样，可以直接取样。分装样品时，虹吸管的一头要插入培养瓶的底部，慢慢放水，以免带入气泡。直接测定当天水样和经过五天培养后水样中溶解氧的差值，即为五日生化需氧量。
c）对于已受污染海区的水样，必须用稀释水稀释后再进行培养和测定。水样稀释的倍数是测定的重要关键。稀释倍数的选择可根据培养后溶解氧的减少量而定，剩余的溶解氧至少有1mg/l.
一般采用20%~75%的稀释量。在初次作时，可对每个水样同事做2~3个不同的稀释倍数。
3.记录与计算。
将每种水样测定结果及时记录在表中，按式（68）计算五日生化需氧量：
bod5=[(d1-d2)-(d3-d4)×f1]÷f268)式中：
bod5——五日生化需氧量，单位为毫克每升；
d1——样品在培养前的溶解氧，单位为毫克每升；
d2——样品在培养后的溶解氧，单位为毫克每升；
d3——稀释水灾培养前的溶解氧，单位为毫克每升；
d4——稀释水灾培养后的溶解氧，单位为毫克每升；
f1——稀释水（v3）在样品(v4)中所占的比例；
f2——水样(v4)在稀释水(v3)中所占的比例。
其中：f1=v3/(v3+v4); f2=v4/( v3+v4)
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