2肿瘤标志物。
定义：观念上肿瘤标志物是从病人血液，尿液或其他样本中找到的某一肿瘤的生化分析物。例如，肝癌的癌胚抗原。
另外，它们的相关性将通过肿瘤标志物定量，在特定标准值以上来说明肿瘤的存在。最后，肿瘤标志物的数量会提示有多少种肿瘤存在或肿瘤的发展处于哪个阶段，并不是所有的标志物都满足定义的标准。
肿瘤标志物的临床限制：
不幸的是，大多数肿瘤标志物对某个已知肿瘤既没有特异性也不能通过定量来判断它们的大小。大多数肿瘤标志物都存在这样的限制性。每种肿瘤的特异性和敏感性能够作为肿瘤的筛选或其定量的指标，需长期评估直至肿瘤标志物的临床和分析的结果出现显著的统计学意义。
当病人被怀疑患有癌症时，医生会要求做肿瘤标志物的定量，在大多数病人中，癌胚抗原有一个正常范围，大约0-10ug/l，但它不是一个很好的筛选指标，因为在其他情况下，如抽烟，酒精性肝硬化，肠炎或慢性肺部疾病时，它也可能高于10ug/l。因此，尽管15ug/l高于那些不抽烟的正常人的参考区间，但这样的值反应的是病人潜在的慢性肝病，肠部疾病或肺部疾病，而不是肿瘤的存在。这种限制性使得癌胚抗原不能通过定量来筛选胃肠道肿瘤。
一个确诊的肿瘤患者的癌胚抗原的显著升高能被临床检测出来。如果肿瘤因**而好转，癌胚抗原水平通常会下降，如果升高这就是试验性的证据，说明肿瘤持续恶化，而病人会被认为预后不良。
肿瘤标志物的实验室检测：
尽管肿瘤标志物可能被定性的检出它们是否存在，但它们更多地进行定量检测和与正常参考值做对比来考虑是否升高。生化技术用于检测这些分析物的变化，这些技术包括从传统的酶学检验，免疫分析到细胞遗传学技术。标志物的生化种类和浓度范围通常决定检测的方法与要求，现在免疫学方法是盛行的定量检测肿瘤标志物的方法。
从历史上看，放免技术是第一种普遍用于检测这些分析物的方法。这种方法用放射活性作为一种性能来定量抗原抗体反应。最近，通过商业化的发展使得各种方法避免了放免技术所存在的弊端。
例如，检测放射性物质，文献的要求和试剂盒短的有效期。新的方法是利用分光光度酶率检测。荧光物质。
极化荧光素。时间分辨荧光和化学发光去定量抗原抗体。以下是这个章节中大多数肿瘤标志物的定量方法。
3聚合酶链反应（pcr）
pcr技术是研究得最深入，运用得最广泛的靶技术，x公司的科学家在2023年第一次介绍了什么是pcr，之后pcr发展成为了分子生物学实验室的一项主要的技术，这个方法是利用寡核苷酸指导dna合成的重复循环，来实现目的序列的体外复制。寡核苷酸的序列是由目的基因来决定的，这些寡核苷酸是在具有两条不同链的靶序列的互补位点上开始合成的。它们之间大约相隔150-3000个碱基对。
pcr的每个循环包括3个步骤：1变性，在缓冲体系中，靶基因在高温下孵化以致于靶链解离。同时加入特定的寡核苷酸引物。
2退火，在这个混合反应体系中，需降温才能使互补的靶序列间发生退火结合。3延伸，延伸阶段通常需在温和的温度下进行。引物在dna聚合酶的作用下，于dna模板上延伸。
每一次循环靶序列在理论上会增加一倍（但实际上最后的几次循环没有这么高的效率）。重复了多次以后（约20-60次），靶序列可扩增100万倍，特定的靶序列扩增产物能通过它特定的长度和内部结构来识别。而非特异性扩增产物很少具有与特定靶序列产物一样的大小，并且这些非特异性产物也不含有与特定靶序列的杂交结构。
在传统的杂交方面，由不完整的碱基组成的引物，可通过非特异性的方法进行退火反应，他能够结合在靶基因的多个位点上，或者纯化基因组dna，因此，对于低丰度的靶基因，非特异性结合的背景，或许比特异性的还要敏感。然而pcr反应，需要通过两个特异性引物反应来解决这个问题。这两个引物，在对应链的相对方向的退火位点上开始合成。
为了能更有效地进行聚合酶链反应，要求第二个引物的退火位点能与第一个退火位点有一个适当的距离。产物的等倍性增加依赖于新引物位点上引物的直接合成。通过这种设计能够更好地提高pcr的敏感性和特异性。
最近技术的更新不仅简化了pcr的操作步骤，同时也提高了它的效率。首先，使用的taq聚合酶是从温泉里生长的嗜温菌和嗜热水生菌体内分离出来的。这些taq聚合酶的半衰期在是40分钟，因此它能耐受pcr中的重复加热和冷却。
这样，它可以不用重复加入新的酶来补充在先前步骤中失活的酶，taq聚合酶在反应开始时就加入进去，这样能有效地简化操作步骤。此外，通过这种方式也能显著地减少在退火和延伸阶段因为高温而引起的非特异性扩增。（）第二个新方法是程序化加热器的发展，热循环器其实是一种可编程的加热器，它能够在没有人看管的情况下实现连续的加热和冷却循环，并且能消除水浴锅与加热器的反应管之间的转换这种令人厌烦的工作。
热循环器现已被许多厂家生产和它已成为了实验室标准配置仪器。
5高脂血症。
血中主要的酯质是甘油三酯和胆固醇，前者是一种重要的能量**，后者是细胞膜和细胞器的组成成分。胆固醇和甘油三酯是脂溶性的，他们在血液当中以脂蛋白形式运输，酯质和特定的蛋白结合成众所周知的载脂蛋白。脂蛋白主要分成四种，1乳糜微粒，把肠内外源性酯质（主要是甘油三酯）运输到外周组织。
2极低密度脂蛋白，它运输内源性甘油三酯，从肝组织到其他组织。3低密度脂蛋白，它主要是把肝内的甘油三酯运输到外周组织。4高密度脂蛋白，它参与内向转运胆固醇，从外周组织到肝，以致于胆固醇能够通过这种途径被排泄。
这些颗粒处于一种活跃的状态，酯质和蛋白之间很大一部分能够相互转换。
1、 革兰染色。
革兰染色是细菌学上使用最广泛的着色方法，同时大部分生物体是根据对它的反应来分类的。
革兰氏阳性的生物体必须拥有完整的细胞壁，相似的生物体会因任何的方法损害了细胞壁而呈革兰氏阴性，这表明了细胞壁保留的染料的重要性，染色的原理如下。
碱性染料扩散到生物体后与碘形成不溶于水的色淀，革兰氏阳性生物体的媒染细胞壁经酒精脱色或丙酮脱水形成一个染料色淀不能通过的屏障，在革兰氏阴性细胞中，细胞壁上的脂类（按比例多于革兰氏阳性细胞）可能被溶解，从而允许结晶紫-碘复合物漏出。对这个学说虽然有很多的反对者，但细胞壁的重要性是不可否认的。
过程：1、 准备和固定已标记的标本。
2、 用结晶紫染色一分钟，然后用碘洗去。
3、 添加更多碘媒染1min
4、 用酒精脱色直到流出的酒精不再出现蓝色为止。
5、 用水冲洗。
6、 在稀释石炭酸复红中复染1min
7、 用清水冲洗并干燥。
很多实验室使用替代方法来区分或复染色，其中有一些是：
丙酮：丙酮或一份丙酮和2份乙醇是比70%的乙醇更快速的脱色剂，快速脱色不利于检测细菌量少的标本，也不利于无经验的技术人员使用。
中性红色：中性红色（中性红色1g，1%乙酸2ml和蒸馏水1000ml）可能被用作复染色。对于染色细胞内的生物体，它是有用的，而且它并不会掩盖革兰氏弱阳性的生物体。
然而，染成的颜色是棕红色的，而且不像稀释石炭酸复红那样清晰。
番红：番红（0.5%番红液在蒸馏水中）是另一种复染剂，但它没有明显的优势，以下是常见的革兰氏阳性的生物，即它们被染成蓝黑色：
葡萄球菌、链球菌、肺炎双球菌、白喉杆菌、炭疽及其组属，梭状芽孢杆菌和真菌。
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