1.简述淀粉和水加热分为哪几个阶段:(12分)
答:淀粉和水加热分为三个阶段:
a.可逆的缓慢吸收组成,淀粉粘度几乎无变化,颗粒膨胀大;
b.当温度至650c左右,淀粉颗粒不可逆很快吸收,颗粒膨胀50~100倍,粘度增大;
c.当温度继续上升,淀粉颗粒变化无定形的空囊,大部分可溶性淀粉,从颗粒中颗粒脱落,称为半透明均质胶体。
2. 简述谷氨酸生产菌的主要特征?(17分)
答: 1.菌体的形态特征:棒、椭圆、短杆,在纤维中单位的成对的八字形的;
无芽孢,不运动、无鞭毛;
3.在通气条件下才能产生谷氨酸。;
4.均需生物素作为生长因子,加硫胺素刺激as1.299,比其他多;
5.脲酶反应,强,阳性;
6.不分解淀粉、脂肪、蛋白质;
7.发酵中有明显形态变化;
8.二氧化碳固定反应强;
酮戊二酸继续向下氧化能力强;
10.柠檬酸合成酶强;
11.不分解利用ga;
12.乙醛酸循环弱;
菌能裂解醋酸,不能裂解石蜡;
14.还原性coⅱ(nadph++h),再氧化进入呼吸链微弱;
15.平板,隆起要高,饱满,圆形白色;
生产菌耐高糖,耐ga;
17.产酸4%以上。
3. 谷氨酸积累应具备哪些那些理想途径,:(18分)
答:(1)一定的糖酵解速度,不能走向乳酸等的发酵。
2)生成丙酮酸后,一部分氧化脱羧生成乙酰coa,一部分固定co2生成草酰乙酸或苹果酸,草酰乙酸与乙酰coa在柠檬酸合成酶作催化作用下,缩合成柠檬酸,再经下面的氧化还原共轭的氨基化反应生成谷氨酸。
3)生成的乙酰coa不向脂肪酸途径转化,全部趋于合成柠檬酸。
4)α-酮戊二酸氧化能力微弱,即不转化为琥珀酸,而成为马蹄形不完整的三羧酸环。
5)异柠檬酸裂解酶活性弱,即不形成二羧酸环。
6)异柠檬酸脱氢酶活性强。
7)l-谷氨酸脱氢酶活性强,在nh3存在下,由α-酮戊二酸转化为谷氨酸。(这点特别重要)
8)nadph再氧化能力欠缺。谷氨酸菌有两种该类酶,即异柠檬酸脱氢酶和l-谷氨酸脱氢酶。
9)造成强的细胞膜透性,以便克服终产物反馈抑制和阻遏,使生产菌产生的谷氨酸不断地渗到细胞外进入培养基中。
4.简述谷氨酸生产中温度对发酵的影响及其控制(13分)
答:温度提高,反应速度加快,生长繁殖快,产物生成提前,但酶很容易受热失活,温度越高失活越快,菌体易老化,温度还能影响生物合成方向。
谷氨酸菌生长最适温度30~32 0c,产生谷氨酸的最适温度一般比生长的温度高为34~37 0c .国内常用的ga菌最适温度:
谷氨酸发酵前期的长菌阶段和种子培养应满足菌体生长最适温度。菌体生长达一定程度后再开始产生氨基酸,因此菌体生长最适温度和氨基酸合成的最适温度是不同的。
菌体生长温度过高,则菌体易衰老,ph高,糖耗慢,周期长,酸产量低。
采取措施:少量多次流加尿素,维持最适生长温度,减少风量等,促进菌体生长。必要时补加玉米浆以促进菌体生长。
发酵前期长菌阶段控制在30~32 0c ,发酵中后期为34~37 0c .
在发酵的中后期菌体生长已基本停止,需要维持最适的产酸温度以利于ga的合成。
5. 在谷氨酸生产中如何克服生物素过量带来的问题?(28分)
答:(1)、 选用油酸缺陷型:在大量的研究工作中发现培养基中缺乏生物素时,只要加入油酸,就能起到和生物素相同的效果。
生物素的作用在于影响细胞膜中的脂肪酸,而油酸的加入直接增加了合成磷脂所需的不饱和脂肪酸,所以选育油酸缺陷型就成为了重要的替代手段。当选用油酸缺陷型时,只要控制油酸的亚适量,就能控制细胞膜的透性,而与生物素的含量无关。
2)、 选用甘油缺陷型:试验证明,限量甘油(0.02%)培养,细胞膜的磷脂含量只有非甘油缺陷型菌株的50%。只有甘油的加入量起作用,而与生物素以及油酸的含量无关。
这些现象都可以解释一个问题,那就是因为磷脂是由脂肪酸、甘油、磷酸和r(胆碱、乙醇酸、丝氨酸、肌醇)4部分组成,缺少其中的一个都不可能合成,控制其中之一,都可以控制磷脂的含量。
(3)、选育温度敏感性变异株: 当细菌进行诱变处理后,可以获得温度敏感性变异株。例如在30゜c时生长旺盛,而在较高温度(37゜c )则不生长,或稍生长,而能大量生成谷氨酸。
于是可用这样的变异株在富含生物素的培养基中,前期进行30゜c培养,当菌的生长达到最大时,提高温度至40゜c ,使其大量积累谷氨酸。
4)、 在生物素丰富的条件下,添加聚氧乙烯乙二醇的棕榈酸(c18)、十七烷酸(c17)、硬脂酸(c16)等的饱和脂肪酸酯类或饱和脂肪酸,都能使大量谷氨酸排出于菌体外。表面活性剂、高级饱和脂肪酸的作用,不在于它的表面效果,而是在不饱和脂肪酸的合成过程中,作为抗代谢物具有抑制作用,对生物素或油酸又拮抗作用,阻遏脂肪酸生物合成,于是磷脂形成减少,膜透性加大,有利于谷氨酸向外渗漏。
5)、在生物素丰富时,培养中途如果添加青霉素、头孢霉素c,可以使谷氨酸生成。青霉素的作用机制与控制生物素、控制油酸或添加表面活性剂以及控制甘油的机制都不同。添加青霉素是抑制细菌细胞壁的后期合成,对细胞壁糖肽生物合成系统起作用。
这是因为青霉素取代合成糖肽的底物而和酶的活性中心结合,使网状结构连接不起来,结果形成不完全的细胞壁。没有细胞壁保护的细胞膜由于膜内外的渗透压差,是细胞膜受到机械损伤,失去了作为渗透障碍物的作用,从而使谷氨酸排出。另一种解释是:
青霉素虽不能抑制磷脂的合成,但能造成磷脂向胞外分泌。
6. 简述在提高谷氨酸产率的途径中添加青霉素,流加糖工艺?(20分)
答:对数生长时菌体正处于大量繁殖时,加入一定量的青霉素,破坏菌体细胞壁,改变细胞对ga的渗透性并抑制菌体增殖,利用菌体所具有的ga合成酶系,控制在适宜的条件下,大量形成ga并泄漏到菌体外。
加青霉素的时间和量是极其重要的,如加得过早会抑制菌体生长;如加得太晚,菌体已形成,青霉素不起作用。
操作要点:(1)大接种量20%,高生物素20~30ug/ml大青霉素量8u/ml;(2)添加青霉素时间2~4hr;(3)补糖:一次补加1。
5%(降2%时才加)多次补加,可补糖蜜(4)加尿素:16hr前ph7.2~7.
3;16~24hrph7.1;24hr以后ph7.0.
7. 简述ga发酵液的组成特征?(12分)
答:(1)发酵液所含的谷氨酸为l-型,一般一谷氨酸铵盐形式存在;
2)发酵液无机盐、残糖、色素、尿素等;此外也有消泡用的花生油、豆油or合成消泡剂等。
3)大量菌体、蛋白质等固形物悬浮在发酵液中,湿菌体约占发酵液的2~5%;
4)发酵液中含有一些少量的发酵副产物:有机酸类(乳酸、a-酮戊二酸和琥珀酸等);氨基酸类(天冬氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、甘氨酸、亮氨酸、组氨酸、谷氨酰胺等)。含量小于1%。
5)发酵液中含有铵离子0.6~0.8%,残糖1%一下。
6)含有一些初级产物,腺嘌呤和尿嘧啶。
8. 味精生产中常见的质量问题有哪些? (28分)
答:(1)、味精发红的原因。
含铁高(除不尽)结晶过程中铁离子解析到溶液中;
2)、发灰的原因。
活性炭粉末残留在母液中。
3)、发黄的原因。
生成色素,母液脱色不完全,烘的时间太长。
4)、味精发糊的原因。
底料太多,投进的晶种带入小晶种,温度波动太大,蒸发速度快,过滤温度高,补料的浓度太大,结晶中杀假晶,母液循环次数太乱。
5)、结晶味精出现大头的原因。
质量不好,杀假晶时使水和假晶接触损伤。
6)、无光泽的原因。
长时间高温操作,烘干时温度太高,时间太长,7)、结晶味精发脆的原因。
结晶过程中高温时间太长,低温时间太长,母液中残留的杂质太多,结晶罐中浓度太高。
9.什么是自然起晶,刺激起晶和投晶种起晶法?(10分)
答:(1)自然起晶:溶液经蒸发浓缩在不饱和区结晶;
2)刺激起晶法:用减压浓缩的方法,溶液在不稳区,用降低温度的方法结晶;
3)投晶种起晶法:把溶液处于介稳区,再投晶种使之结晶。
10. 按照起始物可将氨基酸的合成分为几个家族?(18分)
答: ㈠谷氨酸族(α-酮戊二酸族)
包括:谷氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、赖氨酸和脯氨酸;
㈡丙酮酸族包括:丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸;
㈢天冬氨酸族(早酰乙酸族)
包括:天冬氨酸、天冬酰胺、苏氨酸和异亮氨酸;
㈣磷酸甘油酸族包括:甘氨酸、丝氨酸和半胱氨酸;
㈤芳香族包括:苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸;
另外,组氨酸的合成为单独的一条途径。
11. 6. 合成谷氨酸的反应有几种?(12分)
答:12. .谷氨酸合成的调节机制有几种?(12分)
答:(1)谷aa比天冬aa优先合成。
2)谷aa脱氢酶谷aa对其反馈抑制和反馈阻遏。
3)柠檬酸合成酶 tca的关键酶,受能荷调节,谷aa反馈阻遏,乌头酸反馈抑制。
4)异柠檬酸脱氢酶 α-酮戊二酸反馈抑制。
5)α-酮戊二酸脱氢酶先天丧失或微弱。
6)pep受天冬aa反馈抑制,受谷aa和天冬 aa反馈阻遏。
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