单克隆抗体。
一、制备过程。
1、免疫动物免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏b淋巴细胞的过程。
2、细胞融合采用二氧化碳气体处死小鼠，无菌操作取出脾脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细胞悬液。 将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合，并加入促融合剂聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各种淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞。
3、选择性培养选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞，一般采用hat选择性培养基。在hat培养基中， 未融合的淋巴细胞虽具有次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，但其本身不能在体外长期存活也逐渐死亡。 只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶，并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性，因此能在hat培养基中存活和增殖。
4、杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化在hat培养基中生长的杂交瘤细胞，只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞，因此，必须进行筛选和克隆化。通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。采用灵敏、快速、特异的免疫学方法，筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞，并进行克隆扩增。
经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后，及时进行冻存。。
5、单克隆抗体的大量制备单克隆抗体的大量制备重要采用动物体内诱生法和体外培养法。
二、单抗应用。
自2024年kohler和milstein报道，通过细胞融合建立能产生单克隆抗体的杂交瘤技术以来，这个最基础的具有开创性的理论在生物科学的基础研究以及医学，预防医学，农业科学等领域的广泛应用和实践，充分显示它对生命科学各领域产生的巨大而深远的影响，由于单抗有着免疫血清或抗体无法比拟的优点，迄今全世界已研制成数以千计的单抗，有的已投入市场，有的正在进行应用考核和深入观察。
2.1单抗在诊断学中的应用。
单抗应用最广泛的是诊断，主要用于病原诊断，病理诊断和生理诊断，随着微生物学、寄生虫学，免疫学的研究进展，人类对感染性和寄生虫性疾病有了新的认识，一个病原体存在着许多性质不同的抗原，在同一抗原上，又可能存在许多性质不同的属，种，群，型特异性抗原，采用杂交瘤技术，可以获得识别不同抗原或抗原决定簇的单抗，从而可以对感染性疾病和寄生虫病进行快速准确的诊断，同时可以用于调查疾病流**况，流行毒株或虫株的分类鉴定，为病原的防疫**提供资料。目前应用单抗诊断试剂诊断的人，畜禽，植物等病毒、细菌或寄生虫病已上百种，其中乙肝，狂犬病，乙型脑炎等人兽共患病三十余种；鸡新城疫，马立克，猪瘟等畜禽病二十余种；植物病毒病十余种；人，畜禽细菌病二十余种，弓形虫、疟疾、旋毛虫等寄生虫病三十余种另外，单抗还成功应用于含量极微的激素、细菌毒素、神经递质和肿瘤细胞抗原的诊断。
2.2 单抗应用于临床**。
用单抗**肿瘤是医学界寄于厚望的一项研究，目前已研制出的肿瘤单抗有：胃肠道肿瘤、黑色素瘤、肺癌等数十种，用单抗可能的**途径是采用高亲和并特异的单抗，偶联药物或毒素后以定向杀伤肿瘤，目前该研究在实验动物中已获得成功，而单独使用单抗**人恶性肿瘤获得成功的例子也有报道。使用单抗**畜禽传染病，尤其是病毒病如鸡传染性法氏囊病，成效十分显著。
近年来采用基因工程技术将抗体基因转入植物可以生产大量的单抗，另外具有不同用途的嵌合抗体、人源单抗、重构抗体、小分子抗体的出现，为应用单抗**各类疾病拓宽了道路。
2.3 单抗是生物学研究的有力工具。
目前，单抗已广泛应用于不同学科，其中一部分是为基础理论研究服务的，在病原方面可用于分类、分型和鉴定毒株，可用于探查抗原结构以及用于抗感染，免疫机制和中和抗原的研究，结合分子生物学方法，可以确认病毒抗原蛋白的编码基因，基因突变和转译产物的加工、处理、组装过程，从而进一步研制基因重组疫苗。作为一种特异的生物探针，通过单抗的的免疫组化定位，研究细胞的生理功能和疾病的**，发病机制，对激素和受体可采用单抗的免疫分析，免疫细胞化学定位，大大促进了激素和受体结构与功能，激素作用机理以及内分泌自身免疫性疾病**的研究进展，另外单抗已应用于神经系统，血液系统，药理学和系统发育学，畜牧育种及性别控制等学科的研究工作中，从而极大的推动了整个生物学科的发展。
三、发展现状。
单克隆抗体药物发展经历了四个阶段，分别为：鼠源性单克隆抗体、嵌合性单克隆抗体、人源化单克隆抗体和全人源化单克隆抗体，而在全球的单克隆抗体市场，第四个阶段的全人源化单克隆抗体是其未来的发展方向。
在第一个阶段中，鼠源单克隆抗体是用老鼠制备的普通单克隆抗体药物，但是鼠源单抗应用于人类有较强的免疫原性，主要缺陷是诱发人抗鼠抗体反应，大大限制了其临床应用价值，而且，鼠源性抗体在人体内半衰期短，生物活性降低。而第四阶段中它与人体结合性最好，也是最安全和有效的单克隆抗体。
最新研究技术：
1. 如用人脾细胞与鼠骨髓瘤细胞杂交。
2. 用eb病毒转化人的b淋巴细胞。
3. 用基因工程方法制备嵌合抗体（困难）
4. 噬菌体技术和转基因技术。
以分子生物学技术提取、扩增编码人抗体的dna，构建质粒，建立组合抗体文库，再利用工体文库建立针对某一特定抗原的子文库。
以该技术制备的抗体片段fab是人源抗体，具有建库简单、抗体表达稳定等特点。迄今已有多种抗体产生。该技术具有良好的发展前景和应用前景。
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