2、 总结细胞凋亡检测技术和方法。
答：1） 细胞凋亡的形态学检测。
光学显微镜检测、倒置显微镜检测、荧光显微镜检测、透射电子显微镜检测：细胞凋亡时发生独特的形态变化，如核染色质凝聚、边集，细胞膜的发泡现象及凋亡小体形成。可通过光学显微镜、荧光显微镜和透射电子显微镜观察来鉴定凋亡细胞。
流式细胞仪下的形态学检测。
凋亡细胞体积小、密度大、细胞膜发泡、细胞核破碎，对激光的反射性与坏死细胞及活细胞不同，在流式细胞仪上分别表现为前向角散射光(psc)下降，侧向角散射光(ssc)增加。而psc反映细胞大小，ssc反映细胞的均质性，因此，在光散射图谱上，凋亡细胞的psc低于正常，而坏死细胞的psc高于正常。但由于凋亡和坏死细胞内均有较多碎片，它们的ssc均高于正常，因此，这样不仅可以区分它们，还可检出凋亡细胞的百分率。
2）早期细胞凋亡的检测方法。
膜磷脂结合蛋白v的检测。
细胞凋亡的早期发生主要在细胞膜上，是磷脂对称性改变引起的磷脂酰丝氨酸(ps)暴露于细胞膜外所致。而annexin v是一种钙依赖性的磷脂结合蛋白，对ps具有较高亲和性，它可作为敏感的探针检测细胞膜表面的ps位置。
线粒体膜电位的检测。
线粒体膜电位是由线粒体内膜两侧质子的不对称分布而形成的电化学梯度，在细胞凋亡过程中常因膜孔道大小的改变及转膜电位的降低来调节细胞凋亡。
细胞内氧化还原状态的检测。
细胞内氧化还原状态代表着细胞的生理状态，谷胱苷肽(gsh)作为氧化还原状态的缓冲剂维持其平衡。但当细胞内gsh的排除非常活跃时，细胞液就由还原环境转为氧化环境，导致线粒体膜电位降低，使细胞色素c 从线粒体中转移到细胞液中，启动caspase的级联反应，使细胞开始凋亡。
细胞色素c的定位检测。
细胞色素c除参与细胞内电子传递外，在细胞凋亡中还起着信号物质的作用。正常情况下，它存在于线粒体内外膜之间的腔隙中，与内膜松弛相连。当受到凋亡信号的刺激后，则从线粒体释放到细胞质，并与细胞质中的凋亡蛋白激活因子结合，形成复合物，再启动caspase级联反应，引起细胞凋亡。
caspase-3的检测。
caspase-3作为关键执行分子，在凋亡信号传导的许多途径中发挥着重要功能。通常caspase-3以酶原形式存在于细胞质中，在凋亡早期被激活因此常被用作早期细胞凋亡的指标。
相关基因mrna水平的检测。
在细胞凋亡时有些基因表达异常，检测这些特异基因的表达水平也成为检测细胞凋亡的常用方法。
2） 晚期细胞凋亡的检测方法。
1 dna凝胶电泳。
正常活细胞dna电泳为一条区带，细胞凋亡时核酸内切酶将dna分解成规则的180~200bp的dn**段。因此凋亡细胞 dna电泳出现特征性梯状条带。
2 酶联免疫吸附法。
凋亡细胞染色质dna产生的核小体dna，可与组蛋白 h2a、h2b、h3和h4结合为复合物。应用抗组蛋白和抗dna单抗，借助elisa方法可测定细胞凋亡。
3 染色后的流式细胞仪检测法。
当细胞发生凋亡时，在细胞学上发生一系列特征性变化，如细胞周期停滞、细胞dna和蛋白质含量降低、细胞膜通透性改变以及细胞膜皱缩等。 但在其程度介于正常细胞与坏死细胞之间，其它检测方法较难区分时，通过荧光素染色，利用流式细胞仪即可解决。
4 原位缺口末端标记法(tunel)
在细胞凋亡时，染色质dna双链断裂或单链断裂而产生大量的粘性3′-oh端，在脱氧核糖核苷酸末端转移酶的作用下，将脱氧核糖核苷酸(多为。
dutp)与荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素形成的衍生物标记到dna的3′-oh端，可通过酶联显色或荧光检测定量分析结果。
5 端粒酶检测。
大部分正常体细胞由于缺乏端粒酶活性，每**一次，染色体的端粒会缩短一些。利用反义核酸技术，有效地封闭或抑制肿瘤细胞的端粒酶活性促进肿瘤细胞凋亡，从而对其进行检测。
生物学作业
第二章脂类的化学。一。填空。1.膜主要是由两类分子组成 和 2.磷脂脂肪酸尾的链长可增加膜的流动性。3.膜结构的液态镶嵌型认为大多数蛋白质和脂质能够自由迅速地进行 但不容易从膜的一侧表面 到另一侧表面。4.脂类的分类依据是 5.磷脂的主要不同点是 其主要的生物学功能是 6.鞘磷脂类的分子由 和 组成...
生物学导论作业
现代生物学导论作业。姓名学号学院。1.原核细胞与真核细胞的根本区别是什么？原核细胞与真核细胞根本区别为 有无核膜为界限的细胞核 原核细胞 无核膜，无染色体，如大肠杆菌等细菌 蓝藻 真核细胞 有核膜，有染色体，如酵母菌，各种动物。2.什么是细胞？能进行独立繁殖的有膜包围的生物体的基本结构和功能单位。一...
生物学导论作业
生物学导论hw 05 涵盖 22 24 26 28集内容 提交截止日期 6月3日 负责老师 谢鑫 提交方法 本人提交 北区 太白校区生命科学学院s311 南311 办公室 南区 1308教室，星期一下午7 8节课。电子版提交 为避免转交时漏了作业，手写作业扫描后请最好直接email给谢鑫老师。1 名...