山茱萸果酒中功效性成分及其。
检测方法的**。
摘要：本**对山茱萸果酒中马钱苷，熊果酸等功能性成分进行分析及其检测方法进行**。
关键词：山茱萸；功能性成分；检测方法。
dogwood fruit wine effect in the composition
and detection method
abstract：in this *****, the dogwood fruit wine of functional components was analyzed and its detection methods are discussed.
keywords: cornus、functional ingredients、detection method
山茱萸，又名蜀枣、鼠矢、鸡足、山萸肉、实枣儿、枣皮等。系山茱萸科山茱萸属小乔木或灌木，属名贵滋补药材。临床上习惯以其成熟果实去核**药，具有补益肝肾、涩精固脱之功效。
《神农本草经》中记述：“山茱萸味酸平，主心下邪气，寒热温中，逐寒湿痹，去三虫，久服身轻”。山茱萸作为名贵滋补药材，含有24种矿物元素，16种氨基酸，人体所需要的8种必需氨基酸全部具备，含有va、vc、ve 和vb2等对人有益的成分。
还含有环烯醚萜苷(如马钱苷、莫诺苷)、有机酸（如熊果酸、齐墩果酸等三萜酸，没食子酸）、黄酮、花色素、鞣质等功效成分和大量粗蛋白和粗脂肪等营养成分。这些成分具有补血健胃，提高免疫功能，消除疲劳，延缓衰老，降血压等功效[1]。
将山茱萸加工成保健酒，为我国山茱萸产业的发展及果品的深加工综合利用提供一定的依据，对开发利用山茱萸资源具有重要意义。山茱萸保健果酒不像普通药酒那样只是针对特殊人群，它是具有山茱萸独特香味的低酒度果酒；同时还含有马钱素、熊果酸等功能性成分，起到调节机体、延缓衰老等功用，老少皆宜。
马钱素是山茱萸的主要水溶性成分，无论体内、体外，适当浓度的马钱素有促进淋巴细胞转化作用，高浓度则有抑制作用，对免疫反应有双向调节作用，能增强巨噬细胞吞噬功能，延缓衰老；有良好的防癌、防辐射功效。
现代药理学研究表明，山茱萸降血糖作用的主要活性部位是环烯醚萜类（主要是马钱素和莫罗苷）和三萜酸类（主要为熊果酸和齐墩果酸）。
莫诺苷具有保护细胞免于h2o2诱导的细胞毒性和细胞凋亡的作用，因此可作为一种神经保护类药物。
在山茱萸果中，作为活性成分之一的莫诺苷的含量要远大于马钱素含量。
熊果酸在体外能快速有效地杀死培养细胞，但腹腔注射熊果酸的小鼠免疫指标均明显提高。熊果酸还具有明显的安定与降温作用，同时，熊果酸还是山萸肉。
抑菌的有效成分，能有效地控制细菌、真菌及一些霉菌的生长，其最低抑制酵母菌的浓度为100 mg/l～700 mg/l。
英文名称：gallic acid
中文别名：棓酸；五倍子酸；3,4,5-三羟基苯甲酸；没食子酸（无水）
分子式：c7h6o5
物化性质：针状结晶（由无水甲醇和氯仿中结晶），210℃升华时，得到一个稳定型结晶，258～265℃（分解）和一个不稳定型结晶，熔点225～230℃。密度1.
694g/cm3(60℃)。100～120℃失去结晶水。1g溶于87ml水、3ml沸水、6ml乙醇、100ml乙醚、10ml甘油、5ml丙酮。
不溶于苯、氯仿、石油醚。
没食子酸在体内具有抗菌作用，可**菌痢。具有收敛、止血、止泻作用。
黄酮的功效是多方面的，它是一种很强的抗氧剂，可有效清除体内的氧自由基，如花青素、花色素可以抑制油脂性过氧化物的全阶段溢出，这种阻止氧化的能力是维生素e的十倍以上，这种抗氧化作用可以阻止细胞的退化、衰老，也可阻止癌症的发生。
黄酮可以改善血液循环，可以降低胆固醇，向天果中的黄酮还含有一种paf抗凝因子，这些作用大大降低了心脑血管疾病的发病率，也可改善心脑血管疾病的症状。被称为花色苷酸的黄酮化合物在动物实验中被证明可以降低26%的血糖和39%的三元脂肪酸丙酯，这种降低血糖的功效是很神奇的，但更重要的是它对稳定胶原质的作用，因此它对糖尿病引起的视网膜病及毛细血管脆化有很好的作用。黄酮可以抑制炎性生物酶的渗出，可以增进伤口愈合和止痛，栎素由于具有强抗组织胺性，可以用于各类敏感症。
单宁是山茱萸果酒中所含有的二种酚化合物其中的一种物质，有益于心脏血管疾病的预防。山茱萸果酒中的单宁一般是由山茱萸籽、皮及梗浸泡发酵而来，或者是因为存于橡木桶内而萃取橡木内的单宁而来。单宁的多少可以决定酒的风味、结构与质地。
缺乏单宁的果酒质地轻薄，没有厚实的感觉。单宁丰富的红酒可以存放经年，并且逐渐酝酿出香醇细致的陈年风味。当果酒入口后口腔感觉干涩，口腔黏膜会有褶皱感，那便是单宁在起作用。
采用高效液相色谱法（hplc）对山茱萸中马钱素的定量测定。
2.1.1色谱条件：
色谱柱：agilent c18柱(250 mm× 4 mm)柱温：25 ℃；
流动相：乙腈-水(15﹕85)；流速1ml/min；紫外检测波长：236nm；进样量：10μl。
2.1.2标准曲线：
准确称取马钱素标准品1.52 mg，甲醇定容于25 ml容量瓶中，摇匀；以样品峰面积为据，精密吸取此溶液，制成不等浓度的标准品溶液，作hplc 分析。以峰面积(y)为纵坐标，样品浓度(x)为横坐标，得标准曲线。
2.1.3样品溶液的配置及测定：
酒液中马钱素的提取：吸取酒液1 ml，蒸干，加甲醇超声，过滤，定容到25 ml 容量瓶中，进样时用0.45 μm 滤头过滤（原料中提取马钱素与酒液中提取马钱素方法相同）。
采用高效液相色谱法（hplc）对山茱萸中莫诺甙[5]的定量测定。
2.2.1色谱条件：
色谱柱：agilent c18柱(250 mm× 4 mm)柱温：25 ℃；
流动相：乙腈-水(15﹕85)；流速1ml/min；紫外检测波长：236nm；进样量：10μl。
2.2.2标准曲线：
准确称取莫诺甙标准品2.15 mg，甲醇定容于25 ml容量瓶中，摇匀；以样品峰面积为据，精密吸取此溶液，制成不等浓度的标准品溶液，作hplc 分析。以峰面积(y)为纵坐标，样品浓度(x)为横坐标，得标准曲线。
2.2.3样品溶液的配置及测定：
酒液中莫诺甙的提取：吸取酒液1 ml，蒸干，加甲醇超声，过滤，定容到25 ml 容量瓶中，进样时用0.45 μm 滤头过滤（原料中提取莫诺甙与酒液中提取莫诺甙方法相同）。
采用高效液相色谱法（hplc）对山茱萸果酒中总三萜中熊果酸[3]的定量测定。
2.3.1色谱条件：
色谱柱：agilent c18柱（250 mm×4 mm）柱温：25 ℃；
流动相：甲醇-水(95﹕5) ；流速：1ml/min；紫外检测波长：205nm；进样量：10μl。
2.3.2标准曲线：
准确称取熊果酸标准品4.7 mg，甲醇定容于5 ml容量瓶中，摇匀；以样品峰面积为据，精密吸取此溶液，制成不等浓度的标准品溶液，作hplc 分析。以峰面积(y)为纵坐标，样品浓度(x)为横坐标，得标准曲线。
2.3.3样品溶液的配置及测定：
原料中熊果酸的提取（2023年版《药典》一部）：取山茱萸粉末1 g，加10 ml乙酸乙酯，超声15 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 ml使溶解，作为供试品溶液，进样时用0.45 μm滤头过滤（酒液中提取熊果酸与原料中提取熊果酸相同）。
采用反相高效液相色谱法（rp-hplc）对山茱萸果酒中没食子酸[4]的定量测定。
2.4.1色谱条件：
色谱柱：ymc-pack ods-a (（250mm×4.6mm）柱温：25 ℃；
流动相：0.1% 磷酸-甲醇（75：5）；流速1.0ml/ min；紫外检测波长：210.2nm；进样量：20μl。
2.4.2对照品溶液的制备：
准确称取没食子酸对照品20 mg，用30%甲醇溶解至100 ml的容量瓶中，配制成200 mg/l储备液，其他不同质量浓度的对照品溶液由储备液稀释得到。
2.4.3供试品溶液的制备：
取10 ml酒液置锥形瓶中，加入30 ml 30%甲醇，超声提取30 min，移入50 ml容量瓶中定容，静置之后，吸取上清液经0.45 μm的微孔滤膜过滤后进样。
2.5.1标准曲线的制备：
精密称取120 ℃干燥至恒重的芦丁对照品为5.0 mg，加85 %乙醇溶解，定容至25ml 容量瓶中，摇匀，制成0.2 mg/ml的对照品溶液；分别取该溶液0 .
0 , 0 .2，0 .5 ，1 .
0 ，2 .0 ，3 .0 ，4 .
0 ml于10 ml容量瓶中， 加5 %亚硝酸钠0 .4 ml ，放置6 min，加10 %硝酸铝0 .4 ml，放置6 min，再加4 %氢氧化钠4 ml，加水至刻度，摇匀，放置15 min，在510 nm处测定其吸光度值；以吸光度值为横坐标，样品浓度为纵坐标，绘制标准曲线，计算得标准回归方程c =1 .
286a -0 .048 ，r =0 .9961，在40～800 μg/ml范围内呈良好的线性关系。
2.5.2样品含量测定：
精密吸取黄酮供试品液4 .0 ml，置10 ml比色管中，测定a 值，计算出样品总黄酮含量。
2.6.1采用分光光度法，先用苯抽提除去有机溶剂抽出物后，用乙醇处理将单宁溶解，采用分光光度计测定溶出液在波长500nm处的光密度，由标准曲线即可得到单宁含量。
2.6.2精确量取不同量标准单宁酸溶液与50ml容量瓶中（瓶中预先放好25ml水），假如2ml乙醇、5ml 1mol/l na2co3溶液及2.
5ml钨酸钠-磷钼酸试剂，再加水冲稀至刻度，摇匀后在25℃水浴中放置30min。将此有色溶液倒入比色皿中，用分光光度计，以波长500nm（或红色滤光片）分别测定其光密度。以单宁含量（mg）为横坐标，光密度为纵坐标，绘制成标准曲线。
2.6.3精确称取1g（称准至0.
0001g）已磨细的试样（同时另称试样测定水分），用滤纸包好，用苯在索氏抽提器中抽提8h。而后将试样风干，将风干后的试样放入100ml具磨口玻塞的锥形瓶中，加入20ml乙醇，于沸水浴中加热回流1h。过滤于50ml干容量瓶中，用平头玻璃棒用力挤压瓶中的残渣，将挤出的抽提液也滤入同一容量瓶中，然后向锥形瓶中再加入20ml乙醇，继续在沸水浴中抽提1h，再滤入同一容量瓶中，并用乙醇分次洗涤残渣，直至容量瓶刻度，摇匀，即为样品溶液。
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