兽医内科学实验。
实验一牛病临床诊断和**技术。
3学时）1、目的要求：本实验的目的要求学生掌握：1、兽用注射器的使用。2、掌握常见的动物注射技术，灌药方法，和穿刺技术。
2、方法：先由教师讲解兽用注射器的构造、各部名称和用途，并进行动物注射技术，灌药方法，和穿刺技术的演示，然后学生分组操作，教师现场指导。
3、内容：应用兽医院的病例或牧场的实验动物现场演示和分组操作。
实验仪器、材料：实验动物（牛、羊），动物保定器具，不同规格动物用注射器，消毒剂，注射药物。
1)掌握各种动物注射技术，包括肌肉注射技术、皮下注射技术、静脉注射技术、腹腔注射和部分穴位注射。
2)灌药方法，包括（1）胃管投药法（2）口腔灌药法。
3)穿刺技术，包括瘤胃穿刺、瓣胃穿刺。
实验二个体兽医学特征和群体兽医学特征及临床病案讨论。
3学时）1、目的要求：通过**临床病例幻灯片和录像资料，了解个体兽医学特征和群体兽医学特征。
2、方法：临床病例影像教学，**临床病例幻灯片和录像资料。
3、内容：
1）**并记录牛创伤性网胃心包炎现场诊疗录像资料（个体兽医学特征）
a. 牛创伤性网胃心包炎临床诊断方法。
a. 一般的临床检查：问诊，视诊，听诊，叩诊。
b. 特殊的临床检查：金属探测仪的检查，x光检查等。
b. 牛创伤性网胃心包炎的临床症状。
a. 一般临床症状，如食欲，反刍，体况，生产性能和行为的变化。
b. 特殊临床症状，如心音的变化，心区叩诊界的变化，颌下和胸前水肿，颈静脉扩张。
c. 行为学变化，如上下坡运动行为变化，站立姿势的变化，起立和卧下行为变化等。
2）**并记录规模化蛋鸡场蛋鸡群体现场疾病诊疗录像资料（群体兽医学特征）
a. 规模化蛋鸡场的地理位置与环境；
b. 蛋鸡的品种；
c. 饲养模式：育雏模式，育成模式，产蛋模式；
d. 供料、供水系统：人工供料系统，自动供料系统；
e. 饲料配制；
f. 饲料的品质；
g. 消毒程序。
h. 发病鸡**病情况调查，先前药物**效果分析；
i. 现场病鸡的临床症状，病鸡解剖病理变化；
j. 初步诊断结果，进一步诊断方案。
实验。三、动物亚硝酸盐中毒的复制和解救。
3学时）1、目的要求：本实验目的是让学生掌握临床病例的诊断和**，为综合性实验。要求学生应用兽医临床诊断技术对实际的病例进行临床诊断和实施**；或人工造病（动物中毒病），包括染毒、临床症状、诊断和**，分析中毒的机理和特效解毒药的药理作用。
2、方法：在教师的指导下人工造病（动物中毒病），包括染毒、临床症状、诊断和**，分析中毒的机理和特效解毒药的药理作用，或根据兽医院门诊动物病例或住院的动物病例，进行疾病的系统性诊断、**和疗效观察。
3、内容：兔亚硝酸盐中毒的人工造病、临床观察与**以及亚硝酸盐的定性检验和定量检验，或根据兽医院门诊动物病例或住院的动物病例，进行疾病的系统性诊断、**和疗效观察。
4、实验仪器、材料：可见分光光度计、半自动生化分析仪，实验动物（兔）；或兽医院门诊动物病例或住院的动物病例，动物保定器具，诊断设备，不同规格动物用注射器，消毒剂，**药物等。
5、实验试剂：对氨基苯磺酸溶液、α—萘胺溶液格林氏粉、 0.1％联苯胺冰醋酸溶液、二苯胺浓硫酸溶液、醋酸钠缓冲液、1%亚甲蓝（美兰）、亚硝酸钠标准液、vc注射液、10%葡萄糖注射液、生理盐水等。
实验。四、亚硝酸盐的定性和定量分析。
3学时）1、目的要求：了解饲料中亚硝酸的提取方法；熟悉定性分析及结果判定、定量检测及检测原理；掌握动物亚硝酸盐中毒的机理、特效解毒药及解毒原理。
2、方法：同学事先预习，准备相关试剂，自己独立操作。
3、内容。3.1可疑饲料中亚硝酸盐的提取。
3.2 亚硝酸盐提取液的定性分析。
3.3 亚硝酸盐提取液的定量检测
3.4 实验动物亚硝酸盐中毒模型的复制与解救。
一、实验原理：
1. 对氨基苯磺酸重氮法（格林氏法）原理亚硝酸盐在酸性溶液中与对氨基苯磺酸作用生成重氮化合物，然后与α一萘胺偶合生成紫红色偶氮染料。
2. 联苯胺冰醋酸法原理亚硝酸盐在酸性溶液中，将联苯胺重氮化生成黄色或红棕色颜料。
3. 二苯胺浓硫酸反应原理由于亚硝酸盐有氧化作用（有浓硫酸存在），可使二苯胺氧化，其氧化产物呈兰色。
4. α萘胺比色法原理在微酸性条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸作用生成重氮化合物，再与α-萘胺偶合而生成紫黄色偶氮染料。颜色强度与亚硝酸盐含量成正比。
5. 亚硝酸盐的中毒机理亚硝酸跟离子具有氧化作用，可使血中正常的氧合血红蛋白迅速地被氧化成高铁血红蛋白，从而丧失了血红蛋白正常的携氧功能，导致组织细胞缺氧而引起中毒。
6. 亚硝酸盐特效解毒药美兰（亚甲蓝）解毒机理小剂量美兰在辅酶ⅰ的作用下，转变为白色美兰，白色美兰可使高铁血红蛋白转变为二价铁血红蛋白，恢复血红蛋白正常的携氧功能。
二、实验准备。
1. 仪器设备。
可见分光光度计、半自动生化分析仪。
2. 实验材料。
可疑饲料、家兔。
3. 试剂。
对氨基苯磺酸溶液、α—萘胺溶液格林氏粉、 0.1％联苯胺冰醋酸溶液、二苯胺浓硫酸溶液、醋酸钠缓冲液、1%亚甲蓝（美兰）、亚硝酸钠标准液、vc注射液、10%葡萄糖注射液、生理盐水等。
三、实验方法。
1、 亚硝酸盐的提取。
精密称取5-10g样品置研钵中，加少许玻璃砂和少许70℃水，研成粥状，分次加70℃左右热水提取，将上清液转入100ml容量瓶中。最后定容至刻度。（如颜色深，可加少许活性炭脱色），过滤，即得亚硝酸盐的提取液，备用。
2、亚硝酸盐的定性检验。
1）对氨基苯磺酸重氮法（格林氏法）
取2ml滤液于小试管中，加对氨基苯磺酸溶液2～3滴。2～3分钟后，再加入α-萘胺溶液2-3滴。数分钟后，有亚硝酸盐存在时则出现紫红色，颜色的深浅表示亚硝酸盐含量的多少。
如将试管在70℃水浴中加热数分钟，颜色更明显。粗略比例如下表。
2）格林氏粉法
取滤液1-2 ml于小试管中，然后加入少许试粉，摇匀，如滤液变紫红色，表明检材中有亚硝酸盐存在。
3）联苯胺冰醋酸法
取对氨基苯磺酸重氮法样品制备液2滴于滤纸或点滴板上，加联苯胺一冰醋酸液2滴，如出现棕红色则示有亚硝酸盐存在。
4）二苯胺浓硫酸法。
取滤液1-2滴于点滴板上，加1-2滴二苯胺浓硫酸溶液，立即出现兰色，证明有亚硝酸盐存在。
3、亚硝酸盐的定量检验。
1）吸取亚硝酸盐提取液10ml于25ml比色管中，加水至刻度。
2）另取25ml比色管7支，依次加入0, 0.002, 0.005, 0.
01, 0.015, 0.020, 0.
025mg no-2.，加水稀释至刻度。
3）于标准管和样品管中分别加入0.05ml醋酸钠缓冲液，对氨基苯磺酸液1ml，α-萘胺溶液1ml，摇匀。放置10分钟后，以零管作参比，用1cm比色皿于波长525nm处测定吸光度，绘制工作曲线与之比较。
4）.结果计算。
亚硝酸盐含量（mg／kg）＝ a/m*10
式中：a—样品管中测得含量，μg；m—称取样品量，g 。
4.、实验动物亚硝酸盐中毒的复制和解救。
1）家兔称重。
2）耳静脉注射4％亚硝酸盐。
3）观察记录家兔的临床表现。
4）出现明显的临床症状时，静脉注射1%美兰（1-2mg/kg bw）
四、注意事项。
1.亚硝酸盐在酸性条件下易分解，如送检不及时，夏天往往在死后第二天就不易检出。剩余饲料较易获得阳性结果。
2.格林氏反应十分灵敏，反应很强烈时可以证明亚硝酸盐中毒，反应微弱时，需用灵敏度较小的方法进行，一般要求两种以上方法都呈现阳性，才能证明亚硝酸盐中毒。同时需做空白对照，必要时可进行定量检验。
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