pca60桃一种脱水素蛋白的纯化、免疫定位、抗冻性活性的研究
michael wisniewskia,*,robert webba, ron balsamob, timothy j closec, xiao-ming yud and marilyn griffithd
作者单位西弗吉尼亚州。
维拉诺瓦大学。
加利福尼亚大学。
滑铁卢大学。
综述。脱水素蛋白经常是植物在一定的环境胁迫下产生的，一类富含甘氨酸，亲水性，热稳定的蛋白。早期研究有（1997 植物分子生物学）一个全长的脱水素基因ppdhn1已经从桃中分离出来。
在寒冷的环境胁迫下已经在常绿桃和落叶桃树种定性和定量的表达。相似的结果已经从桃的表达60千道尔顿的脱水素蛋白得到证实。本研究的目的是纯化pca60，检测纯化的pca60的抗冻和防冻活性，利用免疫定位来细胞定位pca60。
pca60是从冬季的桃树(prunus persica [l.] batsch)的树皮层细胞中经过两步纯化过程，分离过程是根据等电点溶解性和体积大小分离蛋白质，纯化的pca60和粗提的蛋白的乳酸脱氢酶的酶活性一样在液氮中经过几个冻融循环，pca表现出明显的抗冻活性，pca60主要是影响冰晶的形态改变和热滞现象。这是第一次证明了脱水素蛋白具有抗冻活性。
免疫定位利用多克隆抗体亲和力纯化合成缩氨酸，富含赖氨酸从脱水素中提出，指明pca60自由分布在木质部薄壁组织中，细胞质原质体中及树皮细胞的细胞核中。虽然脱水素的功能还在推测中但是数据研究表明脱水素具有在脱水环境下防止蛋白质变性的活性。
简介。脱水蛋白家族的产生是在逆境环境的压力下造成细胞脱水。(close 1997).
它们是富含甘氨酸缺乏色氨酸和半胱氨酸的蛋白，温度接近100℃时可溶，此外脱水素的的性质氨基酸的序列特征是在羧基端有多次重复整个多肽序列(close 1997).。这个多肽多为双亲性的螺旋及脂类相互作用的，证明脱水素蛋白是在植物受到环境胁迫下产生的起到保护的作用(mayhew and hartl 1996)。虽然在草本植物中关于脱水素的研究较多，但木本植物中由于脱水素季节性表达的研究十分有限(wisniewski et al.
1996)，但在桃和蓝莓中已有研究。干燥和过冷的逆境胁迫下柑橘植物也产生脱水素基因的表达。关于脱水素在木本植物中的研究桃树中已有大量研究，证明在寒冷的逆境中不同部位组织产生脱水素。
一个脱水素基因已经克隆确定分析，以证明他的表达和干旱及aba相关(artlip and wisniewski 1997)。
相对于许多草本植物脱水素基因的研究木本植物脱水素的基因只有一个(ppdhn1 )被克隆及蛋白pca60。
这个研究的目的是在之前研究的基础上提出纯化pca60的方法，来测定是否pca60具有抗冻的活性，利用脱水素的抗体对脱水素蛋白进行细胞定位，这个研究pca60性质非常重要对于和草本脱水素区别，而且能够更好的研究pca60在桃树在寒冷胁迫环境下起到的作用。
材料和方法。
植物材料蛋白纯化材料一年生桃树枝条的树皮层组织，也用于细胞免疫定位。
蛋白纯化。抗冻性鉴定测乳酸脱氢酶的活性经过9次冻融循环测ldh
细胞免疫定位利用光学和电子显微镜金免疫示踪法immunogold-labeled sections that had been silver-enhanced
抗冻活性分析。
结果分析。图一pca60的纯化 a第一步纯化的结果 b 第二步纯化结果。
60-kda的蛋白为pca60 利用方法聚丙烯酰胺凝胶电泳分离。
图二比较经过冻融的树皮层中的ldh的活性与抗冻的相关性。
图**ca60的ldh的活性，经过冻融循环后？
图6 pca60对冰晶形态有抑制形成的作用。
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