梁晨晨。一、学期目标。
1、 将合成的胰岛素基因序列ins156连与毕赤酵母表达载体ppic9k, 并转化毕赤酵母菌株gs115, 形成gs115-ppic9k-ins156;
2、 寻找到几个不同的分子伴侣与毕赤酵母表达载体ppicz相连；
3、 将构建的毕赤酵母表达载体ppicz-pdi(以分子伴侣pdi为例)，转化菌株gs115-ppic9k-ins156;
4、 观察不同分子伴侣对胰岛素前体产量的影响。
二、学期主要研究目标。
注：内质网到高尔基体，高尔基体到细胞膜的囊泡运输由sm蛋白调控，过表达sm 蛋白编码的基因sly1(内质网到高尔基体)和sec1（高尔基体到细胞膜），sly1对胰岛素前体没有什么影响产量，sec1可以提高胰岛素前体的产量，鉴于别人以及研究过，所有本人就不再使用这个蛋白。[1]
三、参考文献[2-6]
1] hou j, tyo k, liu z, petranovic d, nielsen j. engineering of vesicle trafficking improves heterologous protein secretion in saccharomyces cerevisiae. metab.
eng., 2012, 14(2): 120-127.
2] baumann k, adelantado n, lang c, mattanovich d, ferrer p. protein trafficking, ergosterol biosynthesis and membrane physics impact recombinant protein secretion in pichia pastoris. microbial cell factories, 2011, 10.
3] delic m, goengrich r, mattanovich d, gasser b. engineering of protein folding and secretion-strategies to overcome bottlenecks for efficient production of recombinant proteins. antioxidants & redox signaling, 2014, 21(3):
414-437.
4] guerfal m, ryckaert s, jacobs pp, ameloot p, van craenenbroeck k, derycke r, callewaert n. the hac1 gene from pichia pastoris: characterization and effect of its overexpression on the production of secreted, surface displayed and membrane proteins.
microbial cell factories, 2010, 9.
5] sha c, yu x-w, lin n-x, zhang m, xu y. enhancement of lipase r27rcl production in pichia pastoris by regulating gene dosage and co-expression with chaperone protein disulfide isomerase. enzyme and microbial technology, 2013, 53(6-7):
438-443.
6] zhang w, zhao h-l, xue c, xiong x-h, yao x-q, li x-y, chen h-p, liu z-m. enhanced secretion of heterologous proteins in pichia pastoris following overexpression of saccharomyces cerevisiae chaperone proteins. biotechnology progress, 2006, 22(4):
1090-1095.
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