一、酶学。
1. 酶的提取及纯化的注意事项及酶的纯度指标鉴定。
2. 什么是对照实验?简述其类型及方法。
3. 酶纯化过程中实验记录的注意事项。
4. 酶活力测定方法类型及特点。
5. 写出米-曼式方程式并简述km的意义。
6. 何为酶促反应初速率?反应时间、酶的浓度、底物浓度及反应的平衡常数与初速率有何关系?
7. 简述双分子反应的类型及机制特点。
8. 简述可逆性抑制的动力学特点。
9. 列举基因工程中重要的工具酶及其作用。
二、蛋白质。
名词解释:基因芯片 elisa 双向电泳 proteomics 双向电泳。
(1)原理:当需要分离极多种蛋白质时,普通单向胶的分辨率已不能满足要求。在这种情况下可考虑使用双向电泳来提高分离效果。
双向电泳大都指第一向为等电聚焦,第二向为sds-page电泳,即将等电聚焦的胶条或管状凝胶放在sds-page凝胶上根据蛋白质的分子量进行电泳分离。样品结果电荷和质量两次分离后,电泳的结果不是条带,而是斑点。
蛋白质表达的时空性什么是基因表达的时空性?
-从某种意义上来说, 对蛋白质时空性质的研究已经超出了蛋白质结构生物学的范畴了, 而是要从细胞生物学、发育生物学, 乃至生理学的角度来定位蛋白质, 以及蛋白质体系。
生化4大技术
问答题:1.研究基因结构有什么意义?
2.某研究生发现一个新基因,没人知道它的功能,但怀疑这个基因的表达受药物a的抑制。你能用两种方法证明这个基因和药物a的相关性吗?
3.简述蛋白质组学研究方法的一般过程。(提蛋白,2d电泳,软件分析,取点酶解,肽质谱分析,确定基因)
2.核酸的紫外吸收有何特点?实验中如何利用这一特点研究核酸。(260nm)
3.列举两种最常用的纯化重组蛋白的层析法,简述其原理和过程。(多聚组氨酸,凝胶过滤)1. 凝胶过滤层析 (gel filtration chromatography):
凝胶过滤层析也称为排阻层析或分子筛层析。
l) 凝胶过滤的原理。小分子容易进人胶粒,洗脱较慢;大分子不容易进入。
胶粒,洗脱较快。
2. 离子交换层析 (ion exchange chromatography):
1) 原理:不溶的并带有电荷的固定相所结合的离子在溶液中被其它。
离子如蛋白质可逆性取代的过程。
r+a- +b- =r+b- +a-
这里,r+a- 是阴离子交换剂,而r-a+是阳离子交换剂。
4.怎样将如下实验技术连到给出的实验目的?
杂交用来验证() a. 蛋白质和蛋白质的关系。
杂交用来验证() b. dna和dna的关系。
杂交用来验证c. dna和rna的关系。
4.酵母双杂交系统用来验证d. 蛋白质和dna的关系。
1→ b, 2→ c, 3→ a, 4→ a)
5. 你需要从高尔基体的膜上纯化一种酶,酶的底物及产物的检测方法是已知的。请设计出一套酶蛋白纯化方案,越周密详细越好。
6.现在,你已经得到一种纯化的蛋白质,需要采用分子克隆技术产生大量的该蛋白质。请设计出5套不同的方案,生物合成有活性的该蛋白质。
7.一个研究生在做western blotting时出现了问题。为了找到原因,他做了3个小实验。1.
将二抗点到膜上并固定,加显色试剂观察颜色变化。2. 将一抗点到膜上并固定,加二抗培养,洗膜,加显色试剂观察颜色变化。
3.将蛋白质样品点到膜上并固定,常规一抗,二抗,显色。你知道每个实验的目的是什么吗?
8. 哪些手段可以检测一个基因在蛋白质水平的表达?
9. 简述 his tag 方法纯化蛋白质的原理。
10. 破碎组织和细胞的方法有哪些?
三、信号转导。
名词解释:1.神经共递质。
2 第二信使。
3 受体 4 催化性受体。
5 衔接蛋白。
问答题:6催化型受体的结构特点及功能(以受体酪氨酸激酶为例)
7 g蛋白的活化机制。
8 简述mapk信号通路。
9 smad信号通路。
10 简述stat信号通路。
11 蛋白激酶的分类。
四、糖和膜生物学。
名词解释:1.n-连接糖链。
2.o-连接糖链。
3.糖基化。
4. 糖形。
5. 糖胺聚糖。
6.糖组学。
7.脂质体。
问答题:1. 简述糖复合物的分类及主要功能。
2. 论述糖蛋白糖链对整个分子结构及功能的影响。
3. 简述膜蛋白的分离方法及注意事项。
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生化习题。考试时间 6月11日 周三 晚上18 30 20 30 地点 禧强楼 203 题型 名词解释10个,共20分。简答题6个,共30分。论述题5个,共50分。一 糖蛋白和蛋白聚糖。1 糖链的。一 二 三 四级结构的概念。1 一级结构 单糖残基的组成 排列顺序 相邻单糖残基的连接方式 异头物的构...
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