（4）采样方法：将无菌纸放于采样点上，打开无菌纸，将平板盖打开扣放于无菌纸上，平板在空气中暴露5分钟，即把盖盖好，倒转放置后送检培养。（平板的盖比平板稍大，采样时不要把平板盖内向上，以免污染。
）5）于36±1℃培养48小时，数每个平皿中的菌落数，并作平均计算，代入公式，得出每立方空气中的菌落数。
6）计算公式：细菌总数（cfu/m3）=n×50000/a×t
a=平板面积（cm2） t=平板暴露于空气中时间（min） n=平均菌落数。
b.空气采样器法。
准备用物：采样器基条无菌巾盘**碗镊子酒精棉球。
采样时间：选择消毒处理后与进行医疗活动之前采样。
采样高度：采样器应距地面高度为33cm。
操作程序：1）洗手。
2）打开无菌盘。
3）先启动一分钟，排除涡壳和叶轮附着的细菌及内部气体，然后用酒精棉球擦拭消毒涡壳、叶轮，再启动空转一分钟排气，两次采样之间不需要再消毒，放入无菌盘内。
4）打开电源开关，指示灯亮。
5）在基条塑料外套上标明采样区域的名称并打开两侧胶布。
6）右手戴上手套，以基条底部朝上从外套中取出基条，琼脂表面朝内，左手拿起采样器，将基条插入涡壳内一周。
7）按一下启动按钮，开始采样，采样时间为一分钟。
8）采样器离门窗和人员流动1m以上，且采样器与采样者要保持一定距离（约50cm）。
9）采样完毕，自动停转，关闭电源开关。
10）取出培养基条，放入无菌塑料套（将基条的凹面插入套凸面）送检。
11）取培养基条，放36±1℃孵箱内培养48小时，直接细菌计数和分离坚定细菌。
12）计算：细菌数/m3=培养条上的菌落数×1000/采样时间×40。
13）注意事项：
采样时指示灯不亮，表示电池电压不足，应更换电池，当天用后取出电池。
若叶轮转动时声音异常或速度变慢表示有损坏，需修理后使用，否则影响准确性。
2、物体表面监测。
1）物品准备：①5×5cm的标准无菌规格板、装有无菌棉拭子+10ml采样液的试管、酒精灯和弯盘；②25 m2细菌定量采样皿。
2）采样时间：消毒处理后4小时内进行采样。
3）采样面积：被采表面<100cm2，取全部表面；被采表面》100 cm2，取100 cm2。
4）采样方法：①5×5cm的标准无菌规格板，放在被检物体表面，取出浸在采样液的棉拭子在规格板内横竖往返各涂抹5次，并随之转动棉拭子，连续采样4个规格面积，将棉拭子放入装有10ml采样液的试管中送检。门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体方法采样。
②使用25 cm2细菌定量采样皿，将琼脂表面直接压贴在被检物体表面10-20s后送检。
5）细菌总数检测：将采样管拍打80次，取1ml放入无菌平皿内，每一样本接种于2平皿，内加入已溶化的45℃-48℃的营养琼脂15ml-18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固或各吸0.2ml接种于平板表面并涂布开，然后放入36±1℃温箱培养48小时观察结果。
6）结果计算：细菌总数（cfu/cm2=平板上菌落数×稀释倍数/采样面积（㎝2）。
7）致病菌检测。
3、医务人员手。
1）物品准备：装有无菌棉拭子+10ml采样液的试管、酒精灯和弯盘。
2）采样时间：在消毒后接触病人、从事医疗活动之前进行采样。
3）采样面积及方法：被检人员五指并拢，取出浸在无菌生理盐水采样液的棉拭子在双手指曲面从指根到指端来回擦涂各两次（一只手涂擦面积约30cm2），并随之转动采样棉拭子，将棉拭子放入装有10ml采样液试管内送检。
4）细菌总数检测。
5）结果计算：细菌总数（cfu/cm2=平板上菌落数×稀释倍数/采样面积（㎝2）
6）致病菌检测。
4、使用中消毒剂。
1）物品准备：无菌吸管、无菌试管、酒精灯、火柴和弯盘。
2）采样时间：采样更换前使用中的消毒剂。
3）采样量及方法：用无菌吸管或注射器吸取5ml被检的消毒液注入无菌试管送检。
4）在无菌条件下，用无菌吸管吸取1ml被检样液。加入9ml稀释液中混均，对于醇类和酚类消毒剂，稀释液用普通配羊肉汤即可；对于含氯消毒剂、含碘消毒剂、过氧化物消毒剂，需在肉汤中加入0.1﹪硫代硫酸钠；洗必泰，季铵盐类消毒剂，需在肉汤中加入3﹪（w/v）吐温80和0.
3﹪卵磷脂；醛类消毒剂，需在肉汤中加入0.3﹪甘氨酸。
5）细菌总数检测：用无菌吸管吸取上述溶液0.2ml，滴于干燥普通琼脂平板，每份样品同时做两个平行样。
一平板置20℃培养7天，另一个平板置36±1℃培养72小时记菌落数，检测致病菌。
5、灭菌器械和用品。
1）物品准备：无菌试管和无菌卵圆钳（或大镊子）或装有含相应中和剂的无菌生理盐水采样液的棉拭子、酒精灯、火柴及弯盘。
2）采样时间：在消毒或灭菌处理后，存放有效期内采样。
3）采样量及方法：
在超静台上，按无菌操作原则用无菌卵圆钳夹取有代表性样品（缝针、针头、刀片等小器械取5件）投入无菌试管中送检，或直接浸入需-厌氧培养管和霉菌培养管，前者于30-35℃培养5天，后者于20-25℃培养7天。
对不能用破坏性方法取样的特殊医疗用品，可用装有含相应中和剂的无菌生理盐水采样液的棉拭子在被检物体表面涂抹采样，被采表面<100㎝2，取全部表面；被采表面≥100cm2，取100cm2。
4）细菌总数的检测。
5）致病菌的检测。
四、卫生标准值。
1、各类环境空气、物体表面、医务人员手卫生标准。
允许检出值：
五、相关科室人员职责。
消毒及灭菌培训考核试卷
科室姓名成绩。一 选择题 每题2分，共30分 1 紫外线消毒对细菌最敏感的时期是 a.孕育期 b.生长期 c.稳定期 d.成熟期。2 紫外线消毒对细菌作用最强的是 a.球菌 b.杆菌 c.真菌 d.芽胞。3 紫外线灯管表面必须保持清洁，用 75 酒精纱布或棉球擦拭一次。a 每天 b 每周 c 每月 ...
质量职业健康安全及环境管理保证计划
1 确保安全生产的技术组织措施。1.1 安全生产管理目标。1.1.1 安全目标。健康 安全 环保教育率达到100 工伤死亡人数为零 交通 火灾事故为零 特殊工种持证率100 劳保防护用品配备率100 杜绝重大污染事故。1.2 安全生产保证体系。1.3 安全风险的识别。1.3.1 项目部依据公司程序文...
质量环境职业健康安全目标 指标及管理方案
河北省第二建筑工程公司国富华庭7 楼项目。及管理方案。编制 职务 职称 审核 职务 职称 职务 职称 批准 职务 职称 受控编码 河北二建国富华庭项目部。2006年10月。河北省第二建筑工程公司国富华庭商务公寓7 楼。质量 环境 职业健康安全管理体系目标 指标。一 编制依据 idt iso9000 ...