293细胞是用5型腺病毒75株系转化，含有ad5 e1区的人胚肾亚三倍体细胞系，是一种e1区缺陷互补细胞系。它是加拿大mcmaster university的与于1976年用dna转染技术构建而成。293细胞是贴壁依赖型呈上皮样细胞，表现出典型的腺病毒转化细胞的表型，细胞允许ad5和其他血清型腺病毒在其上增殖。
哺乳细胞的大规模培养方式有三种：贴壁培养、微载体培养、无血清悬浮培养。这三种方式均可用于293细胞的大规模培养。
293细胞在无ca2+或含ca2+培养基中可同样生长，也可生长在血清浓度降低的培养基中。单层培养细胞在5-10%fbs-dmem中能生长很好。一般来讲，1:
10传代后，一周可以长满。严禁过度生长，这点很重要。因为会导致细胞密度加大和堆积，影响病毒斑的形成和转染，传代时也不易打散。
悬浮的293细胞很容易大规模培养，但不容易长期保持稳定。293细胞在传代120次以后，其表型可能改变，生长状况不再完全是单层的了，偶尔会形成局部的细胞成团聚集，应立即抛弃，重新引入新传代的细胞。
293细胞培养特性：
细胞明显适应酸性环境，ph值在6.9～7.1时，可顺利贴壁生长， 换液时动作要轻。一般用高糖的dmem培养基。
2、传代：倒去废液，pbs洗一次(轻)，用0.02%edta与0.
25%trypsin消化，生长良好细胞，培养瓶中轻摇，使之流遍所有细胞表面，即将其吸除或弃去消化30s，然后吸去，再让剩下的edta/trypsin作用30s,镜下观察细胞变圆，就可加dmem终止消化，反复吹打至细胞全成单个悬浮细胞即可。12小时-24小时90%以上细胞贴壁。293细胞传代时机为达80-90%汇合，传代比例为1：
3。细胞在低代时容易贴壁，生长良好，在传到几十代以后，易聚集成团，且贴壁不牢，用pbs冲洗时即可能脱落，即使消化后也不容易吹打成单细胞悬液，最好购入时先大量冻存。
4、复苏293细胞的另一生长特性是贴壁所需时间长且贴壁不牢。细胞冷冻后复苏时，都有不同程度的肿胀，若以50ml培养瓶待细胞长满瓶底的70%～80%时消化冻存，复苏时将其全部接种至2个50ml瓶中时较为合适。刚复苏的293贴壁很慢，复苏接种后24小时内，应尽量减少观察细胞次数或不作观察，以免因晃动而影响细胞贴壁。
复苏后48小时左右观察贴壁情况并进行首次更换培养基比较合适，如果用一次性塑料培养瓶可增加细胞贴壁牢度。换液前宜将培养基预热。
5、转染：体外应用293细胞进行细胞转染时，如果是采用磷酸钙转染，一定要注意293细胞不要全部长满细胞培养盘，长满细胞时加入磷酸钙就会使293细胞大-片的脱落，最好是当293生长到1/2或2/3时进行磷酸钙转染，可以避免细胞的大量脱落。
其它的经验：1、用大瓶培养较小瓶要好，可能是更有利于293均匀的分布，利于营养的摄取。
2、培养液要新鲜，每次只配1000ml，分为2-4瓶，不用的培养液，冻存在-20度，3、要及时传代，最好是细胞基本铺满培养瓶底部，但是细胞之间还没有完全贴紧，总是多少有空隙的时候最好。
4、如果细胞贴壁不好，可能是消化过久，或是培养瓶不够干净，当然要除外细胞污染。
5、如果使用用玻璃培养瓶或皿，可以采用高压灭菌的0.2%明胶溶液预处理培养瓶/培养皿，方法是将明胶加入培养皿，使之浸泡到底面的各个部分，然后吸出，置超净台内晾干即可使用。这样处理后细胞贴壁效果好且镜下细胞立体感强。
如果是新的塑料培养瓶就不用处理。
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